Eight inhibitory monoclonal antibodies define the role of individual P-450s in human liver microsomal diazepam, 7-ethoxycoumarin, and imipramine metabolism.
Eight inhibitory monoclonal antibodies define the role of individual P-450s in human liver microsomal diazepam, 7-ethoxycoumarin, and imipramine metabolism.
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八种抑制性单克隆抗体定义了各个 P-450 在人肝微粒体地西泮、7-乙氧基香豆素和丙咪嗪代谢中的作用。
DOI：
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发表时间：
1999
影响因子：
3.9
通讯作者：
H. Gelboin
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
T. Yang;K. Krausz;Y. Sai;F. Gonzalez;H. Gelboin
八种单独特异性针对人细胞色素 P-450 (P-450) 1A1、1A2、2A6、2B6、2C 亚家族（2C8、2C9、2C18 和 2C19）、2D6、2E1 和 3A4/5 的抑制性单克隆抗体 (MAb) 用于定义单个 P-450 在细胞色素代谢中的作用。人肝微粒体 (HLM) 中的地西泮 (DZ)、7-乙氧基香豆素 (7-EC) 和丙咪嗪 (IMI)。将 MAb 组合添加到六个 HLM 样品中。以 DZ 作为底物，通过向 3A4/5 添加 MAb，所有六个样品中超过 80% 的替马西泮 (TMZ) 形成均被抑制，表明 3A4/5 对 TMZ 形成的贡献为 80%。 2B6 (6-23%)、2C 亚家族 (12-61%) 和 3A4/5 (14-45%) 单克隆抗体可抑制去甲西泮的形成。 1A1、1A2、2A6、2D6 和 2E1 的单克隆抗体不抑制 TMZ 或去甲西泮的形成；这表明它们不参与 DZ 代谢。在六个 HLM 样品中，MAb 定义的 P-450 对 7-EC 脱乙基化的贡献为：2E1 为 17% 至 60%，2A6 为 15% 至 46%，1A2 为 5% 至 22%，反映了每种 P-450 在此活性中的作用和变化。 1A1、2C 亚家族、2D6 和 3A4/5 的单克隆抗体不影响 HLM 样品中的 7-EC 代谢。 IMI 主要通过表达的 2C19 和 2D6 代谢为 2-羟基丙咪嗪，通过表达的 1A2、2C18、2C19 和 2D6 代谢为地昔帕明 (DIM)。表达的 1A1、2C9 和 3A4 显示出 DIM 形成的低活性。在六个 HLM 样品中，五个显示 IMI 羟基化活性 (0.35-2.6 nmol/min/nmol P-450)，而一个 (HL43) 缺乏羟基化活性。所有六个 HLM 样品均显示 N-脱乙基活性 (0.74-1.4 nmol/min/nmol P-450)。 MAb 测定的 2D6 和 2C19 对 2-羟基丙咪嗪形成的贡献范围分别为 47% 至 90% 和 0% 至 49%，而 HL43 未显示 2-羟基化。 P-450 在 DIM 形成中的作用对于 2C19 (13-50%)、1A2 (23-41%) 和 3A4 (8-26%) 不同。这些研究展示了一个系统，用于识别单个 P-450 的定量代谢作用及其在含有多个 P-450 的组织中的个体间变异性。使用抑制性单克隆抗体的系统简单、精确，适用于任何 P-450 介导的催化活性，包括药物、致癌物、诱变剂、有毒化学品和内生素。
Eight inhibitory monoclonal antibodies (MAbs) individually specific to human cytochrome P-450 (P-450) 1A1, 1A2, 2A6, 2B6, 2C subfamily (2C8, 2C9, 2C18 and 2C19), 2D6, 2E1, and 3A4/5 were used to define the role of single P-450s in the metabolism of diazepam (DZ), 7-ethoxycoumarin (7-EC), and imipramine (IMI) in human liver microsomes (HLM). The MAbs were added combinatorially to six HLM samples. With DZ as a substrate, more than 80% of temazepam (TMZ) formation was inhibited in all six samples by the addition of MAb to 3A4/5, indicating an 80% contribution of 3A4/5 to TMZ formation. Nordiazepam formation was inhibited with MAbs to 2B6 (6-23%), 2C subfamily (12-61%) and 3A4/5 (14-45%). The MAbs to 1A1, 1A2, 2A6, 2D6, and 2E1 did not inhibit TMZ or nordiazepam formation; this indicates their noninvolvement in DZ metabolism. The MAb-defined P-450 contribution to 7-EC Odeethylation in six HLM samples was 17 to 60% for 2E1, 15 to 46% for 2A6, and 5 to 22% for 1A2, reflecting the role and variation of each P-450 in this activity. MAbs to 1A1, the 2C subfamily, 2D6, and 3A4/5 did not affect 7-EC metabolism in the HLM samples. IMI is metabolized mainly to 2-hydroxyimipramine by expressed 2C19 and 2D6, and desipramine (DIM) by expressed 1A2, 2C18, 2C19 and 2D6. Expressed 1A1, 2C9, and 3A4 showed low activities for the formation of DIM. Of six HLM samples, five showed IMI hydroxylation activity (0.35-2.6 nmol/min/nmol P-450) while one (HL43) lacked hydroxylation activity. All six HLM samples showed N-deethylation activity (0.74-1.4 nmol/min/nmol P-450). The MAb-determined contribution of 2D6 and 2C19 to 2-hydroxyimipramine formation ranged from 47 to 90% and from 0 to 49%, respectively, while HL43 did not show 2-hydroxylation. The role of P-450s involved in DIM formation varied for 2C19 (13-50%), 1A2 (23-41%), and 3A4 (8-26%). These studies demonstrate a system for identifying the quantitative metabolic role of single P-450s and their interindividual variability in a tissue containing multiple P-450s. The system using inhibitory MAbs is simple, precise, and applicable to any P-450-mediated catalytic activity including that for drugs, carcinogens, mutagens, toxic chemicals and endobiotics.
DOI：
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发表时间：
1999-04
期刊：
Pharmacogenetics
影响因子：
--
作者：
Yang Sai;T. Yang;K. Krausz;F. J. Gonzalez;H. Gelboin
通讯作者：
Yang Sai;T. Yang;K. Krausz;F. J. Gonzalez;H. Gelboin
影响因子：
5.8
作者：
H. Yamazaki;K. Inoue;M. Mimura;Y. Oda;F. Guengerich;T. Shimada
通讯作者：
H. Yamazaki;K. Inoue;M. Mimura;Y. Oda;F. Guengerich;T. Shimada