A rapid and scalable system for studying gene function in mice using conditional RNA interference.
A rapid and scalable system for studying gene function in mice using conditional RNA interference.
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DOI：
10.1016/j.cell.2011.03.012
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发表时间：
2011-04-01
期刊：
影响因子：
64.5
通讯作者：
Lowe SW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Premsrirut PK;Dow LE;Kim SY;Camiolo M;Malone CD;Miething C;Scuoppo C;Zuber J;Dickins RA;Kogan SC;Shroyer KR;Sordella R;Hannon GJ;Lowe SW
RNA干扰是研究基因功能的有力工具，然而，RNAi转基因小鼠的可重复性仍然是一个显著的限制。通过将优化的基于miR30的荧光偶联shRNAs与高效的ES细胞靶向相结合，我们开发了一种快速、可扩展的shRNA转基因小鼠生产流程。利用这个系统，我们建立了8个针对萤火虫和Renilla荧光素酶、Oct4以及肿瘤抑制基因p53、p16INK4a、p19ARF和APC的tet调控的shRNA转基因株，并在体内的广泛组织中展示了有效的基因沉默和GFP跟踪敲除。此外，使用针对APC的shRNA，我们说明了这种方法如何识别一个研究得很好的基因的预测表型和未知功能。此外，通过调控基因沉默，我们验证了APC/Wnt和p19ARF分别是T细胞急性淋巴细胞白血病/淋巴瘤和肺腺癌的潜在治疗靶点。该系统为生产针对任何哺乳动物基因的RNAi转基因小鼠提供了一个经济有效和可扩展的平台。
RNA interference is a powerful tool for studying gene function, however, the reproducible generation of RNAi transgenic mice remains a significant limitation. By combining optimized fluorescence-coupled miR30-based shRNAs with high efficiency ES cell targeting, we developed a fast, scalable pipeline for the production of shRNA transgenic mice. Using this system, we generated eight tet-regulated shRNA transgenic lines targeting Firefly and Renilla luciferases, Oct4 and tumor suppressors p53, p16INK4a, p19ARF and APC and demonstrate potent gene silencing and GFP-tracked knockdown in a broad range of tissues in vivo. Further, using an shRNA targeting APC, we illustrate how this approach can identify predicted phenotypes and also unknown functions for a well-studied gene. In addition, through regulated gene silencing we validate APC/Wnt and p19ARF as potential therapeutic targets in T cell acute lymphoblastic leukemia/lymphoma and lung adenocarcinoma, respectively. This system provides a cost-effective and scalable platform for the production of RNAi transgenic mice targeting any mammalian gene.
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