Activity-based probe profiling of RNF12 E3 ubiquitin ligase function in Tonne-Kalscheuer syndrome.
Activity-based probe profiling of RNF12 E3 ubiquitin ligase function in Tonne-Kalscheuer syndrome.
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DOI：
10.26508/lsa.202101248
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发表时间：
2022-11
影响因子：
4.4
通讯作者：
Findlay, Greg M.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bustos, Francisco;Mathur, Sunil;Espejo-Serrano, Carmen;Toth, Rachel;Hastie, C. James;Virdee, Satpal;Findlay, Greg M.
作者使用基于光交联活性的探针来监测RNF12/RLIM E3泛素连接酶的活性，并报告了吨-Kalscheuer综合征(Tokas)患者变异对催化的影响。泛素化酶广泛存在于真核生物的各个方面，在疾病中经常被破坏。一个例子是E3泛素连接酶RNF12/RLIM，它在发育障碍Tónne-Kalscheuer综合征(Tokas)中突变。RNF12 Tokas变异体在很大程度上扰乱了催化E3泛素连接酶的活性，这表明迫切需要开发方法来评估变异体对患者RNF12活性的影响。在这里，我们使用基于光交联活性的探针(PhotoABPs)来监测RNF12环E3泛素连接酶在正常和致病环境中的活性。我们证明了光ABPs经历了紫外线诱导的RNF12标记，这与它的环E3连接酶活性是一致的。此外，PhotoABPs有力地报告了RNF12 Tokas变体对E3活性的影响，包括环域内的变体和远端非环调控元件。最后，我们证明了这项技术可以快速部署到人类多能干细胞中。综上所述，PhotoABPs是一种通用的工具，可以直接识别人类疾病中E3泛素连接酶活性的中断，从而为致病机制提供新的见解。
The authors use photocrosslinking activity-based probes to monitor RNF12/RLIM E3 ubiquitin ligase activity and report the impact of Tonne-Kalscheuer syndrome (TOKAS) patient variants on catalysis. Ubiquitylation enzymes are involved in all aspects of eukaryotic biology and are frequently disrupted in disease. One example is the E3 ubiquitin ligase RNF12/RLIM, which is mutated in the developmental disorder Tønne-Kalscheuer syndrome (TOKAS). RNF12 TOKAS variants largely disrupt catalytic E3 ubiquitin ligase activity, which presents a pressing need to develop approaches to assess the impact of variants on RNF12 activity in patients. Here, we use photocrosslinking activity-based probes (photoABPs) to monitor RNF12 RING E3 ubiquitin ligase activity in normal and pathogenic contexts. We demonstrate that photoABPs undergo UV-induced labelling of RNF12 that is consistent with its RING E3 ligase activity. Furthermore, photoABPs robustly report the impact of RNF12 TOKAS variants on E3 activity, including variants within the RING domain and distal non-RING regulatory elements. Finally, we show that this technology can be rapidly deployed in human pluripotent stem cells. In summary, photoABPs are versatile tools that can directly identify disruptions to RING E3 ubiquitin ligase activity in human disease, thereby providing new insight into pathogenic mechanisms.
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