健脾化瘀方体外通过外泌体影响肝癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化
健脾化瘀方体外通过外泌体影响肝癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化
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DOI：
10.19378/j.issn.1003-9783.2021.12.002
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
钟崇
中科院分区：
文献类型：
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作者：
冯坤良;陈清莲;谢春凤;钟崇
目的探讨健脾化瘀方(JHD)通过外泌体对肝癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法利用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激MHCC97H细胞,构建肝癌细胞EMT模型。根据处理条件,将细胞分为4组,①对照组:不进行干预;②模型组:TGF-β1(10 ng·mL~(-1));③JHD低浓度组:TGF-β1(10 ng·mL~(-1))+健脾化瘀方(2 mg·mL~(-1));④JHD高浓度组:TGF-β1(10 ng·mL~(-1))+健脾化瘀方(4 mg·mL~(-1))。干预48 h后,采用超速离心法提取各组细胞培养上清液的外泌体,通过透射电镜(TEM)、纳米颗粒追踪分析(NTA)、Western Blot法检测外泌体标志蛋白(CD63、CD81、HsP70、CD9),以及外泌体内吞实验对外泌体进行鉴定。将提取的4组外泌体分别与MHCC97H细胞共培养24 h/48 h后,分离MHCC97H细胞,进行划细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验及Western Blot法检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)。结果透射电镜下观察到外泌体的形态呈囊泡状,分布不一,有单个分布,也有聚集成组,背景清晰,无明显污染物,各组外泌体形态相近,无明显差异,直径在30~140 nm之间;纳米颗粒追踪分析仪检测到4组外泌体粒径的峰值在130~ 150 nm之间,与电镜观察结果基本一致;各组均可检测到外泌体标志蛋白CD63、CD81、HsP70、CD9表达。被PKH26标记的外泌体可被MHCC97H细胞重新吸收内化。与对照组比较,模型组的MHCC97H细胞迁移能力(24、48 h)及侵袭能力均显著增强(P<0.01), E-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01), Vimentin、 N-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,JHD高、低浓度组的MHCC97H细胞迁移能力(24、 48 h)及侵袭能力显著减弱(P<0.01),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.01),Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论健脾化瘀方体外可通过外泌体抑制MHCC97H细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化。