Simple and efficient CRISPR/Cas9-mediated targeted mutagenesis in Xenopus tropicalis.
Simple and efficient CRISPR/Cas9-mediated targeted mutagenesis in Xenopus tropicalis.
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DOI：
10.1002/dvg.22720
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发表时间：
2013-12
期刊：
影响因子：
1.5
通讯作者：
Grainger, Robert M.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nakayama, Takuya;Fish, Margaret B.;Fisher, Marilyn;Oomen-Hajagos, Jamina;Thomsen, Gerald H.;Grainger, Robert M.
我们已经评估了最近开发的CRISPR/Cas（成簇的规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关）系统在两栖动物热带爪蟾（Xenopus tropicalis）中进行基因组修饰的功效。作为模型实验，验证了酪氨酸酶基因的靶向突变，在注射的胚胎中显示出预期的白化病表型。我们通过中断six 3基因进一步测试了这项技术，这是正常眼睛和大脑形成所必需的。当在six 3编码区诱导突变时，以及当通过双重靶向删除基因启动子时，观察到预期的眼和脑表型。我们在这里描述了使用该系统进行基因组编辑的标准化协议。这种简单而快速的基因组编辑方法为非洲爪蟾研究人员提供了一个强大的新的反向遗传学工具。
We have assessed the efficacy of the recently developed CRISPR/Cas (clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated) system for genome modification in the amphibian Xenopus tropicalis. As a model experiment, targeted mutations of the tyrosinase gene were verified, showing the expected albinism phenotype in injected embryos. We further tested this technology by interrupting the six3 gene, which is required for proper eye and brain formation. Expected eye and brain phenotypes were observed when inducing mutations in the six3 coding regions, as well as when deleting the gene promoter by dual targeting. We describe here a standardized protocol for genome editing using this system. This simple and fast method to edit the genome provides a powerful new reverse genetics tool for Xenopus researchers.
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Harland, Richard M.;Grainger, Robert M.
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