The amino-terminus of nitric oxide sensitive guanylyl cyclase α₁ does not affect dimerization but influences subcellular localization.
The amino-terminus of nitric oxide sensitive guanylyl cyclase α₁ does not affect dimerization but influences subcellular localization.
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一氧化氮敏感的鸟类环酶α₁的氨基末端不影响二聚化，而会影响亚细胞定位。
DOI：
10.1371/journal.pone.0025772
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发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Behrends S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kraehling JR;Busker M;Haase T;Haase N;Koglin M;Linnenbaum M;Behrends S
一氧化氮敏感鸟苷酸环化酶（NOsGC）是由α-和β1-亚基形成的异二聚体酶。Sharina等人2008年描述了α1亚基的剪接变体（C-α1），至少缺乏前236个氨基酸，并已被证明在分化的人胚胎细胞中表达。瓦格纳等人2005年已经表明α1-亚基的氨基酸61-128对于定量异源二聚化是必需的，这意味着C-α1-剪接变体应该失去其定量二聚化的能力。在目前的研究中，我们证明了通过与β1亚基共纯化保留了C-α1剪接的定量二聚化。此外，我们使用基于荧光寿命成像（FLIM）的荧光共振能量转移（FRET），使用β1-亚基和α1-亚基或C-α1变体与ECFP或EYFP的融合蛋白。HEK-293细胞中相应组合的分析表明，α1/β1和C-α1/β1的荧光寿命显著短于阴性对照（<0.3 ns）。此外，我们还发现，α1剪接变体中氨基末端的缺失将其引导至更氧化的亚细胞区室。我们的结论是，α1-亚基的氨基端在体内和离体的二聚化是不稳定的，但影响亚细胞运输。
Nitric oxide sensitive guanylyl cyclase (NOsGC) is a heterodimeric enzyme formed by an α- and a β1-subunit. A splice variant (C-α1) of the α1-subunit, lacking at least the first 236 amino acids has been described by Sharina et al. 2008 and has been shown to be expressed in differentiating human embryonic cells. Wagner et al. 2005 have shown that the amino acids 61–128 of the α1-subunit are mandatory for quantitative heterodimerization implying that the C-α1-splice variant should lose its capacity to dimerize quantitatively. In the current study we demonstrate preserved quantitative dimerization of the C-α1-splice by co-purification with the β1-subunit. In addition we used fluorescence resonance energy transfer (FRET) based on fluorescence lifetime imaging (FLIM) using fusion proteins of the β1-subunit and the α1-subunit or the C-α1 variant with ECFP or EYFP. Analysis of the respective combinations in HEK-293 cells showed that the fluorescence lifetime was significantly shorter (≈0.3 ns) for α1/β1 and C-α1/β1 than the negative control. In addition we show that lack of the amino-terminus in the α1 splice variant directs it to a more oxidized subcellular compartment. We conclude that the amino-terminus of the α1-subunit is dispensable for dimerization in-vivo and ex-vivo, but influences the subcellular trafficking.
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