Purification and reconstitution of polyspecific H+/organic cation antiporter human MATE1.
Purification and reconstitution of polyspecific H+/organic cation antiporter human MATE1.
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多特异性 H /有机阳离子逆向转运蛋白人 MATE1 的纯化和重建。
DOI：
10.1016/j.bbamem.2018.07.005
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Nabekura T. & MoriyamaY
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kawasaki T.;Matsumoto T.;Iwai Y.;Kawakami M.;Juge N.;Omote H.;Nabekura T. & MoriyamaY
人多药和毒素排出物1，hMATE1是一种H+/有机阳离子(OC)交换器，负责肾脏和肝脏有毒有机阳离子排泄的最后一步。为了研究转运的机制，我们建立了一套体外实验程序，包括在昆虫细胞中的表达，辛基葡萄糖苷的增溶，纯化，以及重组为脂质体。以hMATE_1为唯一蛋白质组分的蛋白质脂质体以∆、pH依赖和电中和的方式结合放射性标记的四乙基铵(TEA)。此外，含有hMATE_1的脂类洗涤剂胶束与∆的结合表现出类似于转运的pH依赖关系。突变的hMATE1与替换的E273Q完全缺乏这些TEA结合和运输。在二价底物的情况下，运输是产生电的。这些观察结果表明，OC/H+交换的化学计量与衬底电荷无关。HMATE1的纯化和重组被认为有利于了解hMATE1的详细分子机制。结果表明，hMATE1的Glu273在底物结合和转运中起重要作用。
Human MATE1 (multidrugandtoxinextrusion 1, hMATE1) is a H+/organic cation (OC) exchanger responsible for the final step of toxic organic cation excretion in the kidney and liver. To investigate the mechanism of transport, we have established anin vitroassay procedure that includes its expression in insect cells, solubilization with octyl glucoside, purification, and reconstitution into liposomes. The resultant proteoliposomes containing hMATE1 as the sole protein component took up radiolabeled tetraethylammonium (TEA) in a ∆pH-dependent and electroneutral fashion. Furthermore, lipid-detergent micelle containing hMATE1 showed ∆pH-dependent TEA binding similar to transport. Mutated hMATE1 with replacement E273Q completely lacked these TEA binding and transport. In the case of divalent substrates, transport was electrogenic. These observations indicate that the stoichiometry of OC/H+exchange is independent of substrate charge. Purification and reconstitution of hMATE1 is considered to be suitable for understanding the detailed molecular mechanisms of hMATE1. The results suggest that Glu273 of hMATE1 plays essential roles in substrate binding and transport.
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影响因子：
5.8
作者：
Tanihara, Yuko;Masuda, Satohiro;Inui, Ken-ichi
通讯作者：
Inui, Ken-ichi
DOI：
10.1016/0005-2736(92)90334-i
发表时间：
1992-06-11
期刊：
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA
影响因子：
--
作者：
SAEKI, T;SHIMABUKU, AM;KOMANO, T
通讯作者：
KOMANO, T
DOI：
10.1152/ajprenal.00075.2011
发表时间：
2011-09-01
影响因子：
4.2
作者：
Dangprapai, Yodying;Wright, Stephen H.
通讯作者：
Wright, Stephen H.
影响因子：
5.5
作者：
Hiasa, Miki;Matsumoto, Takuya;Moriyama, Yoshinori
通讯作者：
Moriyama, Yoshinori
影响因子：
5.5
作者：
Matsumoto, Takuya;Kanamoto, Takuji;Moriyama, Yoshinori
通讯作者：
Moriyama, Yoshinori