Filter-aided N-glycan separation (FANGS): a convenient sample preparation method for mass spectrometric N-glycan profiling.
Filter-aided N-glycan separation (FANGS): a convenient sample preparation method for mass spectrometric N-glycan profiling.
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DOI：
10.1021/pr401043r
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发表时间：
2014-03-07
影响因子：
4.4
通讯作者：
Thomas-Oates, Jane E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Rahman, Salina Abdul;Bergstroem, Ed;Watson, Christopher J.;Wilson, Katherine M.;Ashford, David A.;Thomas, Jerry R.;Ungar, Daniel;Thomas-Oates, Jane E.
关键词：
我们开发了一种简单的方法，用于使用少于100万个细胞从全细胞裂解物中释放和分离糖蛋白n -聚糖，用于随后的质谱分析。用SDS增溶法制备的细胞蛋白提取物在膜过滤装置中依次处理，最终通过PNGase F在挥发性缓冲碳酸氢铵中酶促释放聚糖。释放的聚糖在离心后的滤液中回收，通常在质谱分析之前进行过甲基化。我们将这种方法称为“过滤辅助n -聚糖分离”，并成功地应用于研究野生型和突变型中国仓鼠卵巢细胞的n -聚糖谱。这种方法很容易复用，并且由于所需的细胞数量很少，因此与重复样品的分析兼容，以评估组织培养样品中聚糖变异性的真实性质。
We have developed a simple method for the release and isolation of glycoprotein N-glycans from whole-cell lysates using less than a million cells, for subsequent implementation with mass spectrometric analysis. Cellular protein extracts prepared using SDS solubilization were sequentially treated in a membrane filter device to ultimately release glycans enzymatically using PNGase F in the volatile buffer ammonium bicarbonate. The released glycans are recovered in the filtrate following centrifugation and typically permethylated prior to mass spectrometric analysis. We call our method “filter-aided N-glycan separation” and have successfully applied it to investigate N-glycan profiles of wild-type and mutant Chinese hamster ovary cells. This method is readily multiplexed and, because of the small numbers of cells needed, is compatible with the analysis of replicate samples to assess the true nature of glycan variability in tissue culture samples.
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DOI：
10.1074/jbc.m110.115998
发表时间：
2010-10-29
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Bateman AC;Karamanska R;Busch MG;Dell A;Olsen CW;Haslam SM
通讯作者：
Haslam SM
DOI：
10.1073/pnas.0901966106
发表时间：
2009-08-11
影响因子：
11.1
作者：
Richardson, Brian C.;Smith, Richard D.;Hughson, Frederick M.
通讯作者：
Hughson, Frederick M.
DOI：
10.1073/pnas.96.3.915
发表时间：
1999-02-02
影响因子：
11.1
作者：
Chatterton, JE;Hirsch, D;Krieger, M
通讯作者：
Krieger, M
DOI：
10.1016/0020-7381(83)80140-5
发表时间：
1983-01-01
期刊：
INTERNATIONAL JOURNAL OF MASS SPECTROMETRY AND ION PROCESSES
影响因子：
--
作者：
DELL, A;OATES, JE;EGGE, H
通讯作者：
EGGE, H
DOI：
10.1074/jbc.m109.068353
发表时间：
2010-02-19
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
North SJ;Huang HH;Sundaram S;Jang-Lee J;Etienne AT;Trollope A;Chalabi S;Dell A;Stanley P;Haslam SM
通讯作者：
Haslam SM