The effects of phospholipids and fatty acids on the oligomer formation of NAP-22
The effects of phospholipids and fatty acids on the oligomer formation of NAP-22
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磷脂和脂肪酸对NAP-22低聚物形成的影响
DOI：
10.1016/j.neulet.2020.135288
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发表时间：
2020
影响因子：
2.5
通讯作者：
Morigaki Kenichi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Odagaki Sin-Ichi;Maekawa Shohei;Hayashi Fumio;Suzaki Toshinobu;Morigaki Kenichi
洗涤剂抗性膜微区（DRM）部分中的各种信号转导分子的恢复表明该区域在细胞功能中的重要性。NAP-22（也称为BASP 1或CAP-23）是神经元富集的钙调素结合蛋白，并且是神经元细胞膜的DRM部分中的主要蛋白质之一。先前的研究表明NAP-22与酸性膜脂质的紧密结合活性和NAP-22的自身相互作用，即，低聚反应本研究通过化学交联后的SDS-PAGE和电镜观察，研究了不同磷脂、溶血磷脂和脂肪酸对NAP-22寡聚化的影响。在pH 6.5-8.5的含有超过20 mM NaCl的溶液中孵育后，通过SDS-PAGE检测到高分子量寡聚体，即使在不存在脂质添加的情况下，并且添加Ca 2 +/钙调蛋白消除了寡聚化。用梯度SDS-PAGE检测与酸性磷脂孵育后形成的更高分子量的寡聚体。在多不饱和脂肪酸的存在下检测到更高质量的低聚物。SDS处理后的样品的电子显微镜分析显示缠结的绳状结构。脂质体结合的NAP-22在交联和SDS处理后显示小的椭圆形或环形结构。这些低聚物被认为是缠结的绳状结构，因为在结构中观察到相同大小的环形结构。这些结果表明NAP-22通过齐聚作用参与液-液相分离。
Recovery of various signal transduction molecules in the detergent-resistant membrane microdomain (DRM) fraction suggests the importance of this region in cellular functions. NAP-22 (also called BASP1 or CAP-23) is a neuron-enriched calmodulin-binding protein and one of the major proteins in the DRM fraction of the neuronal cell membrane. Previous studies showed tight binding activity of NAP-22 to acidic membrane lipids and the self-interaction of NAP-22, i.e., oligomerization. In this study, the effect of various phospholipids, lysophospholipids and fatty acids on the oligomerization of NAP-22 was studied through SDS-PAGE after chemical cross-linking and electron microscopic observation. High molecular mass oligomers were detected by SDS-PAGE after incubation in solutions containing over 20 mM NaCl at pH 6.5–8.5, even in the absence of lipid addition, and the addition of Ca2+/calmodulin abolished oligomerization. Higher molecular mass oligomer formation after incubation with acidic phospholipids was detected with gradient SDS-PAGE. Much higher mass oligomers were detected in the presence of polyunsaturated fatty acids. Electron microscopic analysis of the samples after SDS treatment showed tangled rope-like structures. Liposome-bound NAP-22 showed small oval or annular structures after cross-linking and SDS treatment. These oligomers were suggested to make the tangled rope-like structures, for annular structures of the same size were observed in the structure. These results suggest the participation of NAP-22 to liquid-liquid phase separation through oligomerization.
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