单增李斯特菌lmo0331基因的克隆、结构域分析及原核表达
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期刊：
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通讯作者：
马 勋
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作者：
杜冬冬;张奇文;李红欢;钱凌霄;马 勋
摘 要:试验旨在对单增李斯特菌临床分离株（LM90SB2）的LPXTG基序表面蛋白lmo0331基因进行克隆、蛋白质结构域分析和原核表达。根据GenBank中收录的lmo0331基因序列设计特异性引物，利用PCR方法扩增LM90SB2 lmo0331基因，扩增产物克隆到pMD19-T载体，测序后进行核苷酸序列和蛋白结构域分析；构建表达质粒pET32a-0331，转化BL21（DE3），经IPTG诱导后，利用SDS-PAGE和WB检测重组蛋白。结果表明，LM90SB2 lmo0331基因核酸序列与NTSN株(4b型，绵羊脑，中国江苏)、F2356株（4b型，奶酪，美国）、LL195株（4b型，瑞士）菌株的同源性为100%，与N2306株(4b，李斯特菌病人的血液，瑞士)、02-1792株（4b，加拿大，奶酪）同源性为99.9%。分离株LM90SB2的lmo0331基因全长1956bp，ORF全长为1857bp，共编码618个氨基酸；蛋白结构域预测，lmo0331蛋白具有具有NEL、LRR、IR、PulA、LPXTG结构域。成功获得pET32a-0331，SDS-PAGE显示可见约88ku重组蛋白带，WB表明该蛋白可与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。本研究成功构建了原核表达载体pET32a-0331，实现lmo0331融合蛋白的表达，为进一步研究lmo0331基因的功能以及单抗的制备奠定了基础。