家蚕RNAi效率相关核酸酶基因对RNAi效率的影响

家蚕RNAi效率相关核酸酶基因对RNAi效率的影响
复制标题

DOI：
10.16380/j.kcxb.2023.03.004
复制
发表时间：
2023
期刊：
昆虫学报
影响因子：
--
通讯作者：
杨婉莹
杨婉莹
中科院分区：
--
文献类型：
--
作者：
陈咏琪;尹延萍;冯嘉伟;白新宇;李庆荣;钟仰进;杨婉莹

文献摘要

相似文献

【目的】鳞翅目(Lepidoptera)昆虫消化系统存在的核酸酶是导致RNAi低效的主要原因之一,本研究旨在探索家蚕Bombyx mori RNAi效率相关核酸酶(RNAi efficiency-related nuclease,REase)BmREase对家蚕RNAi低效的影响。【方法】利用RT-PCR对家蚕BmREase cDNA全长序列进行同源克隆和生物信息学分析,并采用最大似然法进行系统发育分析;利用qRT-PCR检测BmREase在游走期家蚕不同组织(头、表皮、脂肪体、中肠、气管、马氏管和丝腺)中的特异性表达。通过向游走期家蚕注射BmREase,家蚕蜕皮激素受体(ecdysone receptor,EcR)基因BmEcR,超气门蛋白(ultraspiracle,USP)基因BmUSP和细胞因子spatzle1(BmSpz1)基因BmSpz1的dsRNA进行RNAi,分析干扰BmREase表达后是否可以提高靶基因dsRNAs的干扰效率。【结果】RT-PCR扩增得到家蚕BmREase(GenBank登录号: XM_021350017.2)全长cDNA序列,其ORF长2 241 bp,编码746个氨基酸残基;生物信息学分析发现,BmREase与人核酸外切酶I 3qe9.1具有极其相似的结构,其Thr7,His33,Ala37,Arg93,Lys97,Tyr159,Asp160,Ser161和Asn174组成的活性结构域能够与核苷酸序列结合,暗示BmREase具有核酸酶活性。qRT-PCR结果显示,BmREase在家蚕游走期的中肠和马氏管中高表达,说明BmREase主要在家蚕消化系统中表达。在家蚕游走期注射dsRNA, BmREase的表达量比空白对照组的高,RNAi干扰BmREase提高了dsBmEcR,dsBmUSP和dsBmSpz1的干扰效率。【结论】家蚕体内存在与人类核酸外切酶相似功能的酶BmREase,其存在可能影响dsRNA在家蚕体内的干扰效果。本研究为利用RNAi进行家蚕基因功能的研究以及进一步开发RNAi防治害虫具有指导性意义。