联合调控CGRP和PPARγ基因的重组载体构建与鉴定
联合调控CGRP和PPARγ基因的重组载体构建与鉴定
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DOI：
10.3760/cma.j.issn.1674-4756.2016.20.001
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
王义生
中科院分区：
文献类型：
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作者：
李岱峰;李劲峰;孙俊魁;王义生
目的 构建与鉴定联合调控降钙素基因相关肽(CGRP)和过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)基因的重组载体。方法 将CGRP基因完整ORF克隆，设计其两端带MluI酶切位点，与TGFP融合蛋白表达单元间用一段柔性链连接，CGRP基因ORF cDNA纯化后与线性化pGFP-V-RS载体连接；按照siRNA的设计原则，设计靶向PPARγ的siRNA寡核苷酸靶序列，将发卡样siRNA寡核苷酸靶序列退火后克隆入线性化pGFP-V-RS载体；再在此载体中克隆入CGRP ORF cDNA片段。进而将此3个质粒作酶切及测序鉴定。结果 实验结果显示，获得的表达CGRP基因的pGFP-V-RS-exCGRP、沉默PPARγ基因表达的pGFP-V-RS-siPPARγ和表达CGRP且同时沉默PPARγ的pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP，经酶切及测序鉴定的结果与设计均完全一致。结论 成功构建出联合调控CGRP表达和沉默PPARγ的双基因重组载体。