An automated liquid jet for fluorescence dosimetry and microsecond radiolytic labeling of proteins.
An automated liquid jet for fluorescence dosimetry and microsecond radiolytic labeling of proteins.
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DOI：
10.1038/s42003-022-03775-1
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发表时间：
2022-08-25
影响因子：
5.9
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中科院分区：
文献类型：
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作者：
X 射线放射分解标记使用宽带 X 射线进行原位羟基自由基标记，以绘制蛋白质相互作用和构象图。高通量密度光束对于克服自由基清除剂至关重要。然而，传统的样品输送环境（例如毛细管流）限制了完全未衰减的聚焦宽带光束的使用。另一种方法是使用液体喷射，我们之前已经证明，使用这种形式的样品输送可以将未聚焦 X 射线源的标记增加十倍。在这里，我们报告了首次使用液体射流在高通量密度微聚焦同步加速器光束线上进行自动在线定量荧光剂量表征和样品曝光。我们的方法可以实现个位数微秒的曝光时间，同时保留高水平的侧链标记。这一发展显着提高了该方法的整体有效性和效率，生成高质量的数据，并为高通量和超快时间分辨原位羟基自由基标记开辟了舞台。高速液体喷射输送系统改进了 X 射线足迹和质谱法来标记蛋白质以进行结构研究。
X-ray radiolytic labeling uses broadband X-rays for in situ hydroxyl radical labeling to map protein interactions and conformation. High flux density beams are essential to overcome radical scavengers. However, conventional sample delivery environments, such as capillary flow, limit the use of a fully unattenuated focused broadband beam. An alternative is to use a liquid jet, and we have previously demonstrated that use of this form of sample delivery can increase labeling by tenfold at an unfocused X-ray source. Here we report the first use of a liquid jet for automated inline quantitative fluorescence dosage characterization and sample exposure at a high flux density microfocused synchrotron beamline. Our approach enables exposure times in single-digit microseconds while retaining a high level of side-chain labeling. This development significantly boosts the method’s overall effectiveness and efficiency, generates high-quality data, and opens up the arena for high throughput and ultrafast time-resolved in situ hydroxyl radical labeling. A high-speed liquid jet delivery system improves the X-ray footprinting and mass spectrometry method to label proteins for structural studies.
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