Organelle-specific zinc detection using zinpyr-labeled fusion proteins in live cells.
Organelle-specific zinc detection using zinpyr-labeled fusion proteins in live cells.
复制标题
DOI：
10.1021/ja806634e
复制
发表时间：
2008-11-26
影响因子：
15
通讯作者：
Lippard, Stephen J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tomat, Elisa;Nolan, Elizabeth M.;Jaworski, Jacek;Lippard, Stephen J.
一种蛋白质标记的方法是用于本地化的锌响应荧光探针在线粒体和高尔基体的活细胞。ZP 1是Zinpyr家族的锌传感器，用苄基鸟嘌呤部分官能化，从而转化为人DNA修复酶烷基鸟嘌呤转移酶（AGT或SNAP-Tag）的底物（ZP 1BG）。纯化的谷胱甘肽S-转移酶标记的AGT与ZP 1BG的标记反应和所得的蛋白质结合传感器的锌响应在体外被证实。新的检测系统，它结合了蛋白质标记方法与锌荧光传感器，在活的HeLa细胞表达AGT在特定的位置进行了测试。这种酶在基因上与定位蛋白融合，定位蛋白将探针锚在目标细胞器上。在高尔基体和线粒体中的锌传感器的本地化，证明了荧光显微镜。蛋白结合荧光检测系统在活细胞中是锌响应的。
A protein labeling approach is employed for the localization of a zinc-responsive fluorescent probe in the mitochondria and in the Golgi apparatus of living cells. ZP1, a zinc sensor of the Zinpyr family, was functionalized with a benzylguanine moiety and thus converted into a substrate (ZP1BG) for the human DNA repair enzyme alkylguaninetransferase (AGT or SNAP-Tag). The labeling reaction of purified glutathione S-transferase tagged AGT with ZP1BG and the zinc response of the resulting protein-bound sensor were confirmed in vitro. The new detection system, which combines a protein labeling methodology with a zinc fluorescent sensor, was tested in live HeLa cells expressing AGT in specific locations. The enzyme was genetically fused to site-directing proteins that anchor the probe onto targeted organelles. Localization of the zinc sensors in the Golgi apparatus and in the mitochondria was demonstrated by fluorescence microscopy. The protein-bound fluroescence detection system is zinc-responsive in living cells.
登录
查看更多内容
影响因子：
3.5
作者：
Pierrel, Fabien;Cobine, Paul A.;Winge, Dennis R.
通讯作者：
Winge, Dennis R.
影响因子：
4.2
作者：
MacDonald, RS
通讯作者：
MacDonald, RS
影响因子：
5.7
作者：
Sekler, Israel;Sensi, Stefano L.;Silverman, William F.
通讯作者：
Silverman, William F.
影响因子：
46.9
作者：
Keppler, A;Gendreizig, S;Johnsson, K
通讯作者：
Johnsson, K
影响因子：
--
作者：
Marks, KM;Rosinov, M;Nolan, GP
通讯作者：
Nolan, GP