敲除 SOSSB1、 SOSSB2 和 SOSSC 基因稳定 HeLa 细胞株的构建
敲除 SOSSB1、 SOSSB2 和 SOSSC 基因稳定 HeLa 细胞株的构建
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DOI：
10.13200/j.cnki.cjb.002138
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
李越希
中科院分区：
文献类型：
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作者：
孙瑜;陈红霞;齐永;李素芹;沈万鹏;饶继先;李佳萌;李晓玲;李越希
目的 构建 SOSSB1、 SOSSB2 和 SOSSC 基因敲除的稳定 HeLa 细胞株。方法 分别设计并合成 SOSSB1、 SOSSB2.和 SOSSC 亚基的两对靶向基因特定外显子的 A、 B 两个单导向核酸（ single guide RNA， sgRNA）及其互补链，与含.BbsⅠ黏性末端的 PX462 载体连接，构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后，分别转染至 HeLa 细胞，用.2 μg ／ mL 的嘌呤霉素培养筛选出稳定 HeLa 细胞。采用 Western blot 法对敲除效果进行鉴定。结果 A、 B sgRNA.均成功插入至 PX462 载体，重组质粒经酶切和测序鉴定，证明构建正确。Western blot 结果表明，筛选出的 SOSSB1、.SOSSB2 和 SOSSC 基因敲除稳定 HeLa 细胞株分别不表达 SOSSB1、 SOSSB2、 SOSSC 蛋白。结论 成功构建了 SOSSB1、.SOSSB2 和 SOSSC 基因敲除的稳定 HeLa 细胞株。