应用流式-荧光原位杂交协助鉴别诊断EB病毒感染的淋巴细胞亚群
应用流式-荧光原位杂交协助鉴别诊断EB病毒感染的淋巴细胞亚群
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DOI：
10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2022.03.038
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
邹琳
中科院分区：
文献类型：
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作者：
苏虹宇;舒逸;傅国;柳梓杨;朱丹;曾腊梅;马德禹;邹琳
目的:建立流式细胞术-荧光原位杂交联用技术(Flow-FISH),探讨Flow-FISH技术在临床EB病毒(Epstein- Barr virus)感染性疾病中感染细胞亚型鉴定的临床前诊断价值。方法:通过Ficoll-paque离心分离法收集重庆医科大学附属儿童医院招募的9例EBV感染患者的外周血标本中单个核细胞;通过qRT-PCR检测细胞EBER1及EBER2表达;通过荧光标记抗体对细胞表面标志物进行检测,经固定破膜剂对标记后细胞进行固定及破膜处理后与FISH探针37 ℃条件下过夜杂交,通过流式细胞仪、荧光显微镜检测细胞状态、表面抗原染色以及FISH探针与靶mRNA的结合。结果:优化固定破膜剂配方,建立0.2% Tween-20 4 ℃破膜15 min为破膜条件,此条件对细胞状态及表面抗原影响小,不干扰流式细胞术对细胞亚群判定。优化杂交液配方,探明20%甲酰胺和7%硫酸葡聚糖在37 ℃过夜条件下杂交为最优杂交条件,此条件下细胞形态及流式分群好,探针杂交效果佳。通过使用Flow- FISH技术能特异性区分各EBV +以及EBV -淋巴细胞系。通过Flow-FISH技术,成功鉴定临床外周血标本中的EBV +淋巴细胞亚群。结论:初步建立流式细胞术-荧光原位杂交联用检测EBV感染细胞亚群技术,为其进一步的临床前实验奠定基础。