Engineering ascorbate peroxidase activity into cytochrome c peroxidase.
Engineering ascorbate peroxidase activity into cytochrome c peroxidase.
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DOI：
10.1021/bi8007565
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发表时间：
2008-09-30
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Poulos, Thomas L.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Meharenna, Yergalem T.;Oertel, Patricia;Bhaskar, B.;Poulos, Thomas L.
细胞色素c过氧化物酶(CCP)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)具有非常相似的结构，但CCP和APX在还原底物方面都不表现出彼此的活性。APX在血红素丙酸酯附近有一个独特的底物结合位点，在那里抗坏血酸与一个表面精氨酸和一个血红素丙酸酯形成H键(Sharp等人)。(2003)NAT。结构。比奥尔。10、303-307)。CCP中的相应区域有一个更长的表面环，APX中抗坏血酸结合所需的关键Arg残基是CCP中的ASN。为了将CCP转化为APX，将抗坏血酸结合环和关键的精氨酸工程到CCP中，获得了CCP2APX突变体。突变的晶体结构表明，工程设计的位置与在APX中发现的几乎相同。当野生型CCP没有APX活性时，CCP2APX以≈12min−1的速率催化抗坏血酸的过氧化，这表明工程设计的抗坏血酸结合环可以结合抗坏血酸。
Cytochrome c peroxidase (CCP) and ascorbate peroxidase (APX) have very similar structures, and yet neither CCP nor APX exhibit each others activities with respect to reducing substrates. APX has a unique substrate binding site near the heme propionates where ascorbate H-bonds with a surface Arg and one heme propionate (Sharp et al. (2003) Nat. Struc. Biol. 10, 303–307). The corresponding region in CCP has a much longer surface loop and the critical Arg residue that is required for ascorbate binding in APX is Asn in CCP. In order to convert CCP into an APX, the ascorbate binding loop and critical arginine were engineered into CCP to give the CCP2APX mutant. The mutant crystal structure shows that the engineered site is nearly identical to that found in APX. While wild type CCP shows no APX activity, CCP2APX catalyzes the peroxidation of ascorbate at a rate of ≈ 12 min−1 indicating that the engineered ascorbate binding loop can bind ascorbate.
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影响因子：
2.9
作者：
Gengenbach, A;Syn, S;Lu, Y
通讯作者：
Lu, Y
影响因子：
2.9
作者：
Mandelman, D;Jamal, J;Poulos, TL
通讯作者：
Poulos, TL
DOI：
10.1107/s0907444998003254
发表时间：
1998-09-01
期刊：
ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION D-BIOLOGICAL CRYSTALLOGRAPHY
影响因子：
--
作者：
Brunger, AT;Adams, PD;Warren, GL
通讯作者：
Warren, GL
DOI：
10.6028/jres.015.032
发表时间：
1935-11-01
影响因子：
--
作者：
Fowler, RM;Bright, HA
通讯作者：
Bright, HA
影响因子：
2.9
作者：
DEFELIPPIS, MR;MURTHY, CP;KLAPPER, MH
通讯作者：
KLAPPER, MH