Fluostatins produced by the heterologous expression of a TAR reassembled environmental DNA derived type II PKS gene cluster.
Fluostatins produced by the heterologous expression of a TAR reassembled environmental DNA derived type II PKS gene cluster.
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DOI：
10.1021/ja104550p
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发表时间：
2010-09-01
影响因子：
15
通讯作者：
Brady, Sean F.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Feng, Zhiyang;Kim, Jeff H.;Brady, Sean F.
与培养无关的方法访问未培养细菌产生的小分子经常受到阻碍，因为无法轻松克隆足够大的环境DNA(EDNA)片段，以捕获可用于异源表达研究的完整生物合成基因簇。在这里，我们展示了包含天然产物生物合成基因的克隆的EDNA巨型文库的同源性筛选，以及酵母中的转化辅助重组(TAR)，可以用于从环境中获得大的、功能完整的天然产物基因簇。本文报道的Edna衍生基因簇是由两个重叠的粘粒克隆使用TAR进行功能重建的。对重组的TAR基因簇产生的三种新的荧光素(F、G和H)进行了分离和结构鉴定。
Culture independent approaches for accessing small molecules produced by uncultured bacteria are often hampered by the inability to easily clone environmental DNA (eDNA) fragments large enough to capture intact biosynthetic gene clusters that can be used in heterologous expression studies. Here we show that homology screening of eDNA mega-libraries for clones containing natural product biosynthetic genes, coupled with transformation-assisted recombination (TAR) in yeast, can be used to access large, functionally intact, natural product gene clusters from the environment. The eDNA derived gene cluster reported here was functionally reconstructed from two overlapping cosmid clones using TAR. The isolation and structure elucidation of three new fluostatins (F, G and H) produced by this TAR reconstructed gene cluster is described.
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