Direct measurement of Gag-Gag interaction during retrovirus assembly with FRET and fluorescence correlation spectroscopy.
Direct measurement of Gag-Gag interaction during retrovirus assembly with FRET and fluorescence correlation spectroscopy.
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DOI：
10.1083/jcb.200303200
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发表时间：
2003-09-29
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Webb WW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Larson DR;Ma YM;Vogt VM;Webb WW
在逆转录病毒组装过程中，多蛋白Gag指导蛋白质多聚化、膜结合和RNA包装。尚不清楚组装是通过细胞溶质中的Gag-Gag相互作用还是在质膜上启动。我们使用了两种荧光技术-双光子荧光共振能量转移和荧光相关光谱-研究劳斯肉瘤病毒在活细胞中的Gag-Gag和膜的相互作用。这两种技术都为细胞质中Gag蛋白之间的相互作用提供了强有力的证据。荧光相关光谱测量的流动性表明，加格是存在于大的胞质复合物，但这些复合物并不完全由加格。核衣壳结构域的缺失消除了Gag相互作用和膜靶向。膜结合结构域的缺失导致增强的胞质相互作用。这些结果表明，Gag-Gag相互作用发生在胞质溶胶中，由核衣壳结构域介导，并且是膜靶向和出芽所必需的。这些方法也具有普遍适用性，在体内研究蛋白质-蛋白质和膜的相互作用，参与形成复杂的大分子结构。
During retrovirus assembly, the polyprotein Gag directs protein multimerization, membrane binding, and RNA packaging. It is unknown whether assembly initiates through Gag–Gag interactions in the cytosol or at the plasma membrane. We used two fluorescence techniques—two-photon fluorescence resonance energy transfer and fluorescence correlation spectroscopy—to examine Rous sarcoma virus Gag–Gag and –membrane interactions in living cells. Both techniques provide strong evidence for interactions between Gag proteins in the cytoplasm. Fluorescence correlation spectroscopy measurements of mobility suggest that Gag is present in large cytosolic complexes, but these complexes are not entirely composed of Gag. Deletion of the nucleocapsid domain abolishes Gag interactions and membrane targeting. Deletion of the membrane-binding domain leads to enhanced cytosolic interactions. These results indicate that Gag–Gag interactions occur in the cytosol, are mediated by nucleocapsid domain, and are necessary for membrane targeting and budding. These methods also have general applicability to in vivo studies of protein–protein and –membrane interactions involved in the formation of complex macromolecular structures.
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影响因子：
3.4
作者：
Gordon, GW;Berry, G;Herman, B
通讯作者：
Herman, B
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作者：
Ma, YM;Vogt, VM
通讯作者：
Vogt, VM
在无细胞系统中组装人类免疫缺陷病毒衣壳的多步，依赖于ATP的途径。
DOI：
10.1083/jcb.136.3.567
发表时间：
1997-02-10
期刊：
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--
作者：
Lingappa JR;Hill RL;Wong ML;Hegde RS
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Hegde RS
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Vogt，VM