Multiplexed protease assays using element-tagged substrates.
Multiplexed protease assays using element-tagged substrates.
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DOI：
10.1016/j.ab.2010.09.008
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发表时间：
2011-01-01
影响因子：
2.9
通讯作者：
Nitz M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lathia US;Ornatsky O;Baranov V;Nitz M
基于电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）的测定由于质量通道之间的高分辨率、灵敏度和技术的可靠性而适合于多路复用。在此，通过半胱氨酸蛋白酶和金属蛋白酶的四重测定证明了基于ICP-MS的蛋白酶测定的潜力。合成蛋白酶钙蛋白酶-1、半胱天冬酶-3、MMP-9和ADAM 10的四种正交肽底物。每个底物在C-末端携带生物素标签，在N-末端携带基于DTPA的镧系元素复合物。结果表明，这是一种简单且可重复的分析技术，在单一和多重测定形式之间具有良好的相关性。
Inductively coupled plasma-mass spectrometry (ICP-MS) based assays lend themselves to multiplexing due to the high resolution between mass channels, the sensitivity, and the reliability of the technique. Here the potential of ICP-MS based protease assays is demonstrated with a quadruplex assay of cysteine proteases and metalloproteases. Four orthogonal peptide substrates were synthesized for the proteases calpain-1, caspase-3, MMP-9, and ADAM10. Each substrate carries a biotin tag at the C-terminus and a DTPA-based lanthanide complex at the N-terminus. The results demonstrate that this is simple and reproducible analysis technique with excellent correlation between the single and the multiplex assay formats.
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