Nanoliter high throughput quantitative PCR.
Nanoliter high throughput quantitative PCR.
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DOI：
10.1093/nar/gkl639
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发表时间：
2006
影响因子：
14.9
通讯作者：
Brenan CJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Morrison T;Hurley J;Garcia J;Yoder K;Katz A;Roberts D;Cho J;Kanigan T;Ilyin SE;Horowitz D;Dixon JM;Brenan CJ
了解由基因表达模式引起的生物学复杂性需要同时准确和精确地测量大量基因的RNA水平。微量平板上的实时聚合酶链式反应(RT-PCR)是定量转录分析的首选方法，但在这种流体形式下将RT-PCR扩展到更高的产量受到成本和逻辑考虑的内在限制。杂交微阵列同时测量数千个基因的转录，但受到低灵敏度、动态范围、准确性和样本吞吐量的限制。这里描述的混合方法结合了RT-PCR的卓越的准确性、精密度和动态范围与微阵列的并行性，该阵列由3072个实时、33个NL聚合酶链式反应(RT-PCR)组成的阵列，大小相当于显微镜载玻片。RT-PCR的准确度和精密度与384孔板上的相同分析相当，但反应体积小了24倍，分析吞吐量提高了24倍，工作流程与标准微板法兼容。
Understanding biological complexity arising from patterns of gene expression requires accurate and precise measurement of RNA levels across large numbers of genes simultaneously. Real time PCR (RT-PCR) in a microtiter plate is the preferred method for quantitative transcriptional analysis but scaling RT-PCR to higher throughputs in this fluidic format is intrinsically limited by cost and logistic considerations. Hybridization microarrays measure the transcription of many thousands of genes simultaneously yet are limited by low sensitivity, dynamic range, accuracy and sample throughput. The hybrid approach described here combines the superior accuracy, precision and dynamic range of RT-PCR with the parallelism of a microarray in an array of 3072 real time, 33 nl polymerase chain reactions (RT-PCRs) the size of a microscope slide. RT-PCR is demonstrated with an accuracy and precision equivalent to the same assay in a 384-well microplate but in a 64-fold smaller reaction volume, a 24-fold higher analytical throughput and a workflow compatible with standard microplate protocols.
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