干扰素γ和TRAIL联合对HaCaT细胞 程序性坏死的影响及机制研究
干扰素γ和TRAIL联合对HaCaT细胞 程序性坏死的影响及机制研究
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DOI：
10.3760/cma.j.issn.0412
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
徐金华
中科院分区：
文献类型：
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作者：
寿艳红;杨璐;杨永生;徐金华
目的观察干扰素γ（IFN⁃γ）和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合对.HaCaT人角质形成细胞程序性坏死的诱导作用，并探讨其作用机制。方法HaCaT细胞分为阴性对.照组（不加药物处理）和实验组，实验组分别加入50 μg/L IFN⁃γ（IFN⁃γ组）、4 μg/L TRAIL（TRAIL组）、.50 μg/L IFN⁃γ + 4 μg/L TRAIL（细胞因子联合组），或40 μmo/L zVAD预处理1 h后同时加入50 μg/L.IFN⁃γ及4 μg/L TRAIL（zVAD联合组）。作用48 h后，光镜下观察细胞形态，噻唑蓝法检测药物对细.胞的增殖抑制作用，双染色法流式细胞仪检测细胞坏死情况，qPCR检测RIP3、MLKL mRNA相对表达.量，Western印迹检测细胞RIP1、RIP3、MLKL及其磷酸化蛋白等的表达，免疫荧光染色观察pRIP3、.pMLKL在细胞中的表达分布，以2′，7′-二氯荧光素二乙酸酯为荧光探针检测各处理对细胞内活性氧.产生的影响。采用SPSS 22进行统计学分析，不同组间观察指标的变化采用单因素方差分析，两两多.重比较采用LSD⁃t 检验。结果细胞因子联合组及zVAD联合组作用48 h后HaCaT细胞出现坏死样.形态特征。噻唑蓝实验显示作用48 h后，IFN⁃γ组、TRAIL组、细胞因子联合组、zVAD联合组、阴性对.照组细胞存活率分别为73.16% ± 5.71%、81.46% ± 4.68%、72.18% ± 2.93%、69.67% ± 3.24%、100%，.5组间差异有统计学意义（F = 24.34，P < 0.001）。细胞因子联合组、zVAD联合组细胞坏死率分别为.9.86% ± 1.31%、10.33% ± 2.16%，均高于阴性对照组（5.26% ± 0.91%，t 值分别为4.61、5.07，均P <.0.05）。qPCR结果示，细胞因子联合组、zVAD联合组RIP3、MLKL mRNA表达水平明显高于阴性对照.组（tRIP3分别为0.99、1.84，tMLKL分别为1.51、2.17，均P < 0.05）。Western印迹结果示，与阴性对照组相.比，细胞因子联合组RIP1、RIP3、MLKL及其磷酸化蛋白表达水平升高（均P < 0.05），且zVAD预处理.后caspase 8水平下降，上述蛋白表达进一步升高。荧光显微镜示IFN⁃γ和TRAIL联合作用后，细胞质.中可见强绿色点状或团块状荧光斑点（pRIP3），在细胞膜可见明显红色荧光斑点（pMLKL）。活性氧.检测示细胞因子联合组平均荧光强度高于阴性对照组，t = 702.00，P < 0.05。结论IFN⁃γ和TRAIL.可联合诱导HaCaT细胞程序性坏死，并伴有活性氧水平上升。