不同浓度 miR-155mimics 和 miR -155 inihibitor 在足细胞中的转染效果
不同浓度 miR-155mimics 和 miR -155 inihibitor 在足细胞中的转染效果
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DOI：
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
杜秀日
中科院分区：
文献类型：
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作者：
凌霄雁;林栩;郑心彤;古贤君;梁钊;覃卿;杜秀日
目的 探讨瞬时转染 miＲ-155mimics 和 miＲ-155 inihibitor 化学合成物在足细胞中表达变化及其稳定情况。.方法 体外培养小鼠肾小球足细胞，用脂质体法将 miＲ-155mimics/NC、miＲ-155 inihibitor/NC、Cy3 miＲ-155 mimics/inhibitor NC 转染足细胞，构建足细胞内 miＲ-155 高表达模型、低表达模型、荧光基团。然后用免疫荧光显微镜观察不同剂量LipofectamineTM 2000 转染不同浓度 Cy3 miＲ-155 NC 后的荧光转染效果。用实时荧光定量 PCＲ 技术检测足细胞中 miＲ-155mimics 浓度梯度(50、80、100 nmol/mL)、miＲ-155 inihibitor 浓度梯度(80、100、150 nmol/mL)的 miＲNA-155 表达。.结果 达到一定剂量的 LipofectamineTM 2000 足以饱和不同浓度的 miＲNA，并将不同浓度 Cy3 miＲ-155 NC 成功转入足细胞内，且转染效率达 80%以上。qＲT-PCＲ 结果显示转染 miＲ-155mimics、miＲ-155 inihibitor 24 h 后，miＲ-155 在足细胞中的表达明显改变，与阴性对照组(NC) 比较差异有统计学意义，表明转染成功。转染 80 nmol/mL 浓度的 miＲ-155mimics，miＲ-155 在足细胞中的表达明显上调 (P＜0．001)，与其他浓度对比表达量升高，差异有统计学意义。转染150 nmol/mL 浓度的 miＲ-155 inihibitor，miＲ-155 在足细胞中的表达明显下调(P＜0．001)，与其他浓度对比表达量降低，.差异有统计学意义。.结论 LipofectamineTM 2000 达到适当剂量时将各工作浓度的 miＲNA-155 转入足细胞内的转染效果高。80 nmol/mL 的 miＲ-155mimics 和 150 nmol/mL 的 miＲ-155 inhibitor 可能较适合用于实验研究。