Activation of the cAMP-specific Phosphodiesterase PDE4D3 by Phosphorylation
Activation of the cAMP-specific Phosphodiesterase PDE4D3 by Phosphorylation
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通过磷酸化激活 cAMP 特异性磷酸二酯酶 PDE4D3
DOI：
--
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发表时间：
1999
影响因子：
4.8
通讯作者：
M. Conti
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Jaeseung Lim;G. Pahlke;M. Conti
4型磷酸二酯酶（PDE 4）的剪接变体受磷酸化调节。在这些蛋白质中，保守区域位于氨基末端结构域（其是磷酸化的靶标）和催化结构域之间。以前的研究表明，嵌套删除涵盖这一地区的催化活性的增加，这表明该域施加抑制约束催化。在这里，我们进一步研究了这个域的存在和功能。当来自FRTL-5细胞的PDE 4D 3与内切蛋白酶Lys-C孵育时，观察到水解活性的时间依赖性增加。激活被蛋白酶抑制剂废除，当使用磷酸化酶时，激活不存在。用PDE 4D特异性抗体进行的蛋白质印迹分析表明，Lys-C处理将PDE 4D 3的催化结构域与抑制结构域分离。与识别该结构域内的表位的抗体一起孵育导致天然或重组PDE 4D 3的活性增加3至4倍。同样，这些抗体对PDE的激活作用与蛋白激酶A磷酸化的激活作用具有相似的性质，而不是相加作用。酵母双杂交系统检测到PDE 4D 3的抑制结构域与调控结构域和催化结构域之间的相互作用。Ser 54突变为Ala在监管结构域减少或取消这种相互作用，而Ser 54突变为带负电荷的天冬氨酸加强it. These数据强烈支持的假设，即抑制性结构域是存在于PDE 4D和磷酸化的监管结构域导致激活的酶通过调节抑制和催化结构域之间的相互作用。
Splicing variants of type 4 phosphodiesterases (PDE4) are regulated by phosphorylation. In these proteins, a conserved region is located between the amino-terminal domain, which is the target for phosphorylation, and the catalytic domain. Previous studies have indicated that nested deletions encompassing this region cause an increase in catalytic activity, suggesting this domain exerts an inhibitory constraint on catalysis. Here, we have further investigated the presence and function of this domain. A time-dependent increase in hydrolytic activity was observed when PDE4D3 from FRTL-5 cells was incubated with the endoproteinase Lys-C. The activation was abolished by protease inhibitors and was absent when a phosphorylated enzyme was used. Western blot analysis with PDE4D-specific antibodies indicated the Lys-C treatment separates the catalytic domain of PDE4D3 from the inhibitory domain. Incubation with antibodies recognizing an epitope within this domain caused a 3- to 4-fold increase in activity of native or recombinant PDE4D3. Again, PDE activation by these antibodies had properties similar to, and not additive with, the activation by protein kinase A phosphorylation. An interaction between the inhibitory domain and both regulatory and catalytic domains of PDE4D3 was detected by the yeast two-hybrid system. Mutations of Ser54 to Ala in the regulatory domain decreased or abolished this interaction, whereas mutations of Ser54 to the negatively charged Asp strengthened it. These data strongly support the hypothesis that an inhibitory domain is present in PDE4D and that phosphorylation of the regulatory domain causes activation of the enzyme by modulating the interaction between inhibitory and catalytic domains.
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cAMP 介导的低 Km cAMP 磷酸二酯酶的磷酸化显着刺激其催化活性。
DOI：
10.1073/pnas.85.23.9071
发表时间：
1988
影响因子：
11.1
作者：
Grant,PG;Mannarino,AF;Colman,RW
通讯作者：
Colman,RW
来自大鼠支持细胞的两种结构相关的 cAMP 磷酸二酯酶的特性和激素调节。
DOI：
--
发表时间：
1991
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Swinnen,JV;Tsikalas,KE;Conti,M
通讯作者：
Conti,M
低 Km、咯利普兰敏感的 cAMP 磷酸二酯酶的结构表征。
DOI：
--
发表时间：
1992
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Jin,SL;Swinnen,JV;Conti,M
通讯作者：
Conti,M
通过大鼠组织中加速降解对 cAMP 进行短期反馈调节。
DOI：
--
发表时间：
1987
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Gettys,TW;Blackmore,PF;Redmon,JB;Beebe,SJ;Corbin,JD
通讯作者：
Corbin,JD
磷酸化导致人血小板中 cAMP 磷酸二酯酶的激活。
DOI：
--
发表时间：
1988
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Macphee,CH;Reifsnyder,DH;Moore,TA;Lerea,KM;Beavo,JA
通讯作者：
Beavo,JA