绵羊Izumo2 cDNA的克隆及原核表达
绵羊Izumo2 cDNA的克隆及原核表达
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DOI：
10.13484/j.nmgdxxbzk.20150509
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
邢万金
中科院分区：
文献类型：
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作者：
丹彤;周晓婷;王耀新;邢万金
克隆绵羊Izumo2 cDNA片段后原核表达并纯化GST-Izumo2融合蛋白，为下一步研究Izumo2在睾丸和精子上的定位及与其它精卵融合相关蛋白的相互作用奠定基础。【方法】：以绵羊睾丸组织总cDNA为模板，根据GenBank序列(XM—004015399.1)设计引物克隆绵羊Izumo2 cDNA，全长为813 bp，构建原核表达质粒pGEX-Izumo2，转化E.coli BL21感受态菌，用IPTG诱导表达，并采用SDS-PAGE切胶纯化法纯化GST-Izumo2融合蛋白，用Western-blot鉴定所得融合蛋白。【结果】：克隆了813 bp的绵羊Izumo2 cDNA片段，其中编码区为666 bp，BLAST结果显示其与GenBank数据库中的绵羊预测序列相似度为98.6%，并在E.coli BL21中成功诱导表达了分子量约为50 kDa的GST-Izumo2融合蛋白。【结论】：成功地克隆并原核表达了绵羊GST-Izumo2融合蛋白，为制备抗绵羊Izumo2蛋白的抗体和进一步研究Izumo2在绵羊睾丸中的分布和功能奠定了基础