Optochemical control of RNA interference in mammalian cells.
Optochemical control of RNA interference in mammalian cells.
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DOI：
10.1093/nar/gkt806
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发表时间：
2013-12
影响因子：
14.9
通讯作者：
Deiters A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Govan JM;Young DD;Lusic H;Liu Q;Lively MO;Deiters A
短干扰RNA（siRNA）和微小RNA（miRNA）已广泛用于哺乳动物组织培养和模式生物中以选择性地沉默感兴趣的基因。该技术的一个局限性是缺乏对基因沉默事件的精确外部控制。使用安装在核碱基上的可光裂解的保护基团是规避这种限制的有希望的策略，提供了对siRNA或miRNA活化的高度空间和时间控制。在这里，我们已经设计，合成和位点特异性纳入新的photocaged鸟苷和尿苷RNA亚磷酰胺短RNA双链体。我们证明了这些photocaged siRNA的适用性，在光调控外源绿色荧光蛋白报告基因和内源性靶基因，有丝分裂马达蛋白，Eg5的表达。用笼状RNA分子研究了两种不同的方法：RISC催化RNA切割的光调节和种子区域识别的光调节。利用光调节这两种功能的能力使得这种光化学方法能够应用于广泛的小的调节RNA分子。
Short interfering RNAs (siRNAs) and microRNAs (miRNAs) have been widely used in mammalian tissue culture and model organisms to selectively silence genes of interest. One limitation of this technology is the lack of precise external control over the gene-silencing event. The use of photocleavable protecting groups installed on nucleobases is a promising strategy to circumvent this limitation, providing high spatial and temporal control over siRNA or miRNA activation. Here, we have designed, synthesized and site-specifically incorporated new photocaged guanosine and uridine RNA phosphoramidites into short RNA duplexes. We demonstrated the applicability of these photocaged siRNAs in the light-regulation of the expression of an exogenous green fluorescent protein reporter gene and an endogenous target gene, the mitosis motor protein, Eg5. Two different approaches were investigated with the caged RNA molecules: the light-regulation of catalytic RNA cleavage by RISC and the light-regulation of seed region recognition. The ability to regulate both functions with light enables the application of this optochemical methodology to a wide range of small regulatory RNA molecules.
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