Protocol for structural and biochemical analyses of RhoA GTPase.
Protocol for structural and biochemical analyses of RhoA GTPase.
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DOI：
10.1016/j.xpro.2021.100541
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发表时间：
2021-06-18
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Zheng Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lin Y;Watanabe-Chailland M;Zheng Y
在与三磷酸鸟苷(GTP)或GTP类似物形成的复合体中，Ras GTP酶在两种可相互转化的构象之间表现出动态平衡--非活化态1和活化态2。与RAS不同，Rho GTP结合形式的Rho GTP酶是否也表现出多个构象尚不清楚。在这里，我们描述了一种用于RhoA GTP酶的结构和生化分析的方案。该方法也适用于其他Rho GTP酶的鉴定。有关本协议的使用和执行的详细信息，请参阅。GTP和GTP类似物结合形式中野生型和突变型RhoA的纯化利用X射线结晶学和核磁共振光谱分析RhoA的结构。RhoA与GTP或GTP类似物形成的复合体中Ras GTP酶的生化分析表明，两种可相互转化的构象之间存在动态平衡--失活状态1和活性状态2。与RAS不同，Rho GTP结合形式的RhoGTP酶是否也表现出多种构象尚不清楚。在这里，我们描述了一种用于RhoA GTP酶的结构和生化分析的方案。该方法也适用于其他Rho GTP酶的鉴定。
Ras GTPases in complex with Guanosine triphosphate (GTP) or GTP analog exhibit dynamic equilibrium between two interconvertible conformations—an inactive state 1 and an active state 2. Unlike Ras, it remains unclear if the GTP-bound form of Rho GTPases also exhibits multiple conformational states. Here, we describe a protocol for structural and biochemical analyses of RhoA GTPase. This protocol can be adapted for the characterization of other Rho GTPases. For details on the use and execution of this protocol, please refer to. Purification of wild-type and mutant RhoA in both GDP- and GTP analog-bound forms Structural analyses of RhoA using both X-ray crystallography and NMR spectrometry Biochemical assays of RhoA for effector binding and nucleotide exchange Ras GTPases in complex with GTP or GTP analog exhibit dynamic equilibrium between two interconvertible conformations—an inactive state 1 and an active state 2. Unlike Ras, it remains unclear if the GTP-bound form of Rho GTPases also exhibits multiple conformational states. Here, we describe a protocol for structural and biochemical analyses of RhoA GTPase. This protocol can be adapted for the characterization of other Rho GTPases.
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DOI：
10.1107/s090744491003982x
发表时间：
2011-04
期刊：
Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography
影响因子：
--
作者：
Evans PR
通讯作者：
Evans PR
DOI：
10.1107/s0907444904019158
发表时间：
2004-12-01
影响因子：
2.2
作者：
Emsley, P;Cowtan, K
通讯作者：
Cowtan, K
影响因子：
2.9
作者：
McEwen, DP;Gee, KR;Neubig, RR
通讯作者：
Neubig, RR
影响因子：
5.5
作者：
Salomon-Ferrer, Romelia;Goetz, Andreas W.;Walker, Ross C.
通讯作者：
Walker, Ross C.
DOI：
10.1107/s2059798319011471
发表时间：
2019-10-01
影响因子：
2.2
作者：
Liebschner, Dorothee;Afonine, Pavel V.;Adams, Paul D.
通讯作者：
Adams, Paul D.