Nonfluorescent quenchers to correlate single-molecule conformational and compositional dynamics.
Nonfluorescent quenchers to correlate single-molecule conformational and compositional dynamics.
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DOI：
10.1021/ja2119964
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发表时间：
2012-04-04
影响因子：
15
通讯作者：
Puglisi, Joseph D.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen, Jin;Tsai, Albert;Petrov, Alexey;Puglisi, Joseph D.
单分子Förster共振能量转移（smFRET）是一种实时研究生物分子构象动力学的有效方法。然而，研究相互作用配体如何与生物分子的构象动力学相关并调节生物分子的构象动力学是极具挑战性的，这是由于具有高量子产率和最小光谱重叠的有限数量的荧光染料的可用性。在这里，我们报告使用非荧光猝灭剂（黑洞猝灭剂，BHQ）作为受体的smFRET。使用Cy 3/BHQ对，我们准确地跟踪核糖体在真实的时间延长过程中的构象变化。我们展示了单色FRET的应用程序与tRNA的组成动力学的核糖体的构象动力学。我们使用正常的Cy 5 FRET受体来观察荧光标记的tRNA的到来，伴随着核糖体从锁定到解锁构象的转变。我们的研究结果说明了非荧光猝灭剂在单分子相关性研究中的潜力。
Single-molecule Förster resonance energy transfer (smFRET) is a powerful method to study the conformational dynamics of a biomolecule in real-time. However, studying how interacting ligands correlate with and regulate the conformational dynamics of the biomolecule is extremely challenging due to the availability of a limited number of fluorescent dyes with both high quantum yield and minimal spectral overlap. Here, we report the use of a non-fluorescent quencher (Black Hole Quencher, BHQ) as an acceptor for smFRET. Using a Cy3/BHQ pair, we accurately follow conformational changes of the ribosome during elongation in real time. We demonstrate the application of single-color FRET to correlate the conformational dynamics of the ribosome with the compositional dynamics of tRNA. We use the normal Cy5 FRET acceptor to observe arrival of a fluorescently-labeled tRNA with a concomitant transition of the ribosome from the locked to the unlocked conformation. Our results illustrate the potential of non-fluorescent quenchers in single-molecule correlation studies.
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影响因子：
64.8
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
7.4
作者：
Orte, Angel;Clarke, Richard W.;Kienerman, David
通讯作者：
Kienerman, David
DOI：
10.1073/pnas.0805299105
发表时间：
2008-10-07
影响因子：
11.1
作者：
Marshall, R. Andrew;Dorywalska, Magdalena;Puglisi, Joseph D.
通讯作者：
Puglisi, Joseph D.
DOI：
10.1073/pnas.0908077106
发表时间：
2009-09-15
影响因子：
11.1
作者：
Fei, Jingyi;Bronson, Jonathan E.;Gonzalez, Ruben L., Jr.
通讯作者：
Gonzalez, Ruben L., Jr.
影响因子：
16.8
作者：
通讯作者：
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