双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术结合核酸杂交 侧流条快速检测牛肉中的鸡、鸭、猪源性成分
双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术结合核酸杂交 侧流条快速检测牛肉中的鸡、鸭、猪源性成分
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DOI：
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
柳海宾
中科院分区：
文献类型：
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作者：
曹婷婷;袁毅;王晶;柳海宾
摘 摘 要: 目的 建立双拖尾重组聚合酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)结合核酸杂交侧流条(nucleic acid hybridization-lateral flow strip, NAH-LFS)快速检测牛肉中鸡源、鸭源、猪源性成分的可视化检测技术。 方法 采用多重双拖尾 RPA 技术与 NAH-LFS 相结合, 对鸡、鸭、猪线粒体 D 环区域设计特异性拖尾 RPA 引物, 扩增出双拖尾的 RPA 产物。鸡、鸭、猪 3 个物种 RPA 产物的拖尾序列分别与红、黄、蓝 3 种颜色的金纳米探针和侧流条上的检测探针杂交。 结果 鸡、鸭、猪 3 个物种 RPA 产物与探针杂交后形成肉眼可见的红、黄、蓝 3 色条带, 整个 RPA 扩增(15 min)和侧流条检测(5 min)过程在 20 min 内即可完成。该方法对牛肉中鸡、鸭、猪肉的检出限达 0.01%, 且仅对鸡、鸭、猪肉 DNA 有特异性, 与其他 10 个物种的 DNA 均无交叉反应。采集 50 份市售牛肉样品, 使用该方法进行真实性检测: 10 份牛肉干、10 份生牛肉、10 份酱牛肉中未检测出其他动物源性成分, 10 份牛肉馅料中检测出 1 份含猪源性成分, 10 份牛肉片中检测出 1 份含鸡源性成分。该方法与聚合酶链式反应结合凝胶电泳的检测结果具有很好的一致性。 结论 RPA 技术结合 NAH-LFS 具有特异性强、灵敏度高、操作简单的优点, 可实现牛肉中鸡、鸭、猪源性成分的同时可视化快速检测。