Site-specific C-terminal and internal loop labeling of proteins using sortase-mediated reactions.
Site-specific C-terminal and internal loop labeling of proteins using sortase-mediated reactions.
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DOI：
10.1038/nprot.2013.101
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发表时间：
2013-09
期刊：
影响因子：
14.8
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
蛋白质定点修饰的方法需求量很大。产生生物偶联物的反应应该是定量的、位置特定的、与所涉及的生物/化学目标的性质和大小有关的多功能性的，需要对目标进行最小程度的修改，在生理条件下表现出可接受的动力学，并且与其他标记方法正交。索尔特酶介导的转肽反应符合这些标准。在这里，我们描述了两种正交索糖酶A酶的表达和纯化条件，并提供了允许任何给定蛋白质在其C-末端功能化或在内部位点对选定蛋白质进行功能化的方案。山梨酸酶介导的反应只需几分钟，但反应时间可以延长以提高产率。
Methods for site-specific modification of proteins are in high demand. Reactions that yield bioconjugates should be quantitative, site-specific, and versatile with respect to nature and size of the biological/chemical targets involved, require minimal modification of the target, display acceptable kinetics under physiological conditions, and be orthogonal to other labeling methods. Sortase-mediated transpeptidation reactions meet these criteria. Here we describe the expression and purification conditions for two orthogonal sortase A enzymes and provide the protocol that allows functionalization of any given protein at its C-terminus or for select proteins at an internal site. Sortase-mediated reactions take only a few minutes, but reaction times can be extended to increase yields.
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DOI：
10.1083/jcb.201108103
发表时间：
2011-11-28
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Guimaraes CP;Carette JE;Varadarajan M;Antos J;Popp MW;Spooner E;Brummelkamp TR;Ploegh HL
通讯作者：
Ploegh HL
影响因子：
4.7
作者：
Hess GT;Cragnolini JJ;Popp MW;Allen MA;Dougan SK;Spooner E;Ploegh HL;Belcher AM;Guimaraes CP
通讯作者：
Guimaraes CP
DOI：
10.1073/pnas.1101046108
发表时间：
2011-07-12
影响因子：
11.1
作者：
Chen, Irwin;Dorr, Brent M.;Liu, David R.
通讯作者：
Liu, David R.
影响因子：
46.9
作者：
Keppler, A;Gendreizig, S;Johnsson, K
通讯作者：
Johnsson, K
影响因子：
4.7
作者：
Parthasarathy, Ranganath;Subramanian, Shyamsundar;Boder, Eric T.
通讯作者：
Boder, Eric T.