基因编辑技术对大肠杆菌 yjjW 基因点突变的两步法策略
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DOI：
10.13343/j.cnki.wsxb.20200151
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发表时间：
2021-01
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
何晓青
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张琦;梁雅静;张宇馨;陈玲慧;韩钟娆;李贝贝;金一;何晓青
目的为了实现对大肠杆菌靶基因的点突变，本研究将同源重组系统与CRISPR-Cas9技术相结合，探索一种高效、简捷的两步法策略。 方法将靶基因的上下游同源臂和标记基因（amp）与pKOV质粒连接，获得pKOV-HR重组质粒。将pKOV-HR转化至大肠杆菌，借助其自身RecA重组系统，介导DNA发生同源重组，获得靶基因敲除菌株。随后，靶基因的点突变采用pSGKP-km和pCasKP-apr双质粒系统。首先，设计与amp结合具有定向引导作用的spacer序列，并利用overlap PCR获得带有靶基因点突变的同