Engineering a methyllysine reader with photoactive amino acid in mammalian cells.
Engineering a methyllysine reader with photoactive amino acid in mammalian cells.
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DOI：
10.1039/d0cc03814h
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发表时间：
2020-10-18
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Islam K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Arora S ;Sappa S ;Hinkelman K ;Islam K
蛋白质中的甲基赖氨酸位点被一系列读取器域识别，这些读取器域介导蛋白质相互作用以控制细胞过程。在这里，我们设计了一个色域，一个必需的甲基赖氨酸读取器，通过琥珀抑制突变携带4-叠氮多- l -苯丙氨酸（AzF），并证明了它在人类细胞中结合和交联甲基化蛋白的潜力。我们进一步开发了一种具有增强交联潜力的两个AzF单元的第一个色域变体，适合于分析瞬时甲基赖氨酸相互作用组。甲基赖氨酸读取器被设计为携带哺乳动物细胞中的光活化氨基酸来分析相互作用的伙伴。
Methyllysine sites in proteins are recognized by an array of reader domains that mediate protein-protein interactions for controlling cellular processes. Herein, we engineer a chromodomain, an essential methyllysine reader, to carry 4-azido-L-phenylalanine (AzF) via amber suppressor mutagenesis and demonstrate its potential to bind and crosslink methylated proteins in human cells. We further develop a first-of-its kind chromodomain variant bearing two AzF units with enhanced crosslinking potential suitable for profiling the transient methyllysine interactome. A methyllysine reader is engineered to carry photoactivatable amino acid in mammalian cells to profile interacting partners.
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