一种细胞内快速标记邻近蛋白复合物的新方法
一种细胞内快速标记邻近蛋白复合物的新方法
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DOI：
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
蔡剑平
中科院分区：
文献类型：
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作者：
刘健;周姗;戴大鹏;蔡剑平
目的 构建可诱导、细胞适用性广的细胞内快速标记邻近蛋白复合物新方法。方法 体外合成TurboID编码基因，并与Tet-on系统一并插入改造后的慢病毒载体，病毒包装后侵染HeLa细胞以融合表达TurboID及目的蛋白YB1或对照蛋白GFP。使用不同浓度的强力霉素处理细胞24h以诱导融合蛋白的表达，加入50 μM生物素继续培养15-120min以使TurboID将临近蛋白进行生物素标记，免疫印迹法检测生物素标记的蛋白含量。结果 成功构建了可诱导的TurboID融合表达慢病毒载体。获得的病毒侵染HeLa细胞，应用0.125 μg/ml以上的强力霉素即可诱导细胞产生TurboID融合蛋白。生物素处理15 min 以上可得到大量生物素标记的蛋白。结论 构建了快速标记邻近蛋白复合物的检测体系——TurboID系统，该系统具有可诱导、生物素标记迅速及细胞适用性广等优点，可广泛应用于大多数动物及人体细胞内蛋白复合物的筛查研究。