禽致病性大肠杆菌cOmpT单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定

禽致病性大肠杆菌cOmpT单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定
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DOI：
10.11843/j.issn.0366-6964.2020.12.021
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发表时间：
2020
期刊：
畜牧兽医学报
影响因子：
--
通讯作者：
刘秀梵
刘秀梵
中科院分区：
其他
文献类型：
--
作者：
薛菲;杨梓纯;许炎辉;王娅玲;喻婷;樊毛迪;刘娟华;高崧;刘秀梵

文献摘要

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旨在制备禽致病性大肠杆菌(APEC)染色体编码外膜蛋白(cOmpT)的特异性单克隆抗体,本研究利用实验室已构建的 APEC cOmpT重组表达质粒 pET-28a-compT'经TPTG诱导表达后,获得以包涵体形式存在的约36ku的重组蛋白cOmpT,利用尿素浓度梯度透析复性获得纯化蛋白cOmpT,并以此免疫BALB/c小鼠。建立间接ELISA检测方法,最适抗原包被浓度为0. 625 pg .mL-1,最适血清稀释度为1∶6400。4次免疫后取小鼠脾进行细胞融合,采用有限稀释法多轮筛选后得到3株能稳定分泌针对cOmpT蛋白的单克隆抗体,分别命名为1G8,2C3和2G3,均为IgG2b亚类。3株杂交瘤细胞上清ELISA抗体效价分别为1∶200,1∶3 200和1∶3 200。Westernblot结果显示,3株单抗均能与cOmpT发生特异性反应,而不与其他受检菌发生交叉反应。运用原核表达系统对compT基因进行截短表达﹐对单克隆抗体针对的cOmpT抗原表位进行鉴定,结果显示单抗1G8、2C3和2G3识别的抗原表位分别是83DQDWMDS89,90SNPGTWP95和197TFKYSGW203。本研究成功制备了3株抗cOmpT蛋白的单克隆抗体,并对其识别的抗原表位进行了鉴定,为cOmpT蛋白功能研究和APEC新型表位疫苗研发奠定了基础。