Quantification of Antisense Oligonucleotides by Splint Ligation and Quantitative Polymerase Chain Reaction.
Quantification of Antisense Oligonucleotides by Splint Ligation and Quantitative Polymerase Chain Reaction.
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DOI：
10.1089/nat.2021.0040
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发表时间：
2022-03
影响因子：
4
通讯作者：
Watts JK
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Shin M;Meda Krishnamurthy P;Devi G;Watts JK
在实验和临床标本中可靠地检测和定量反义寡核苷酸(ASO)对于了解基于寡核苷酸的新疗法的生物学功能至关重要。在这项研究中，我们描述了一种检测和定量生物样品中ASO的方法，利用ASO作为夹板来指导互补探针的连接，并使用实时定量聚合酶链式反应来监测连接产物。该方法可以在6对数线性范围内检测到血清、肝、肾、肺、心脏、肌肉和脑组织中低水平的2‘-O-甲氧基乙基(2’-O-MoE)缺口ASO。这种方法可以定量各种类型的化学修饰的ASOS，包括硫代磷酸键、2‘-O-甲基、2’-O-MoE、锁定核酸以及siRNA。该方法不需要改装探头，使用标准的实验室设备即可完成，是一种快速、灵敏、可靠、可广泛应用的技术。该检测方法在生物样品中治疗性寡核苷酸的检测中具有潜在的应用前景。
Reliable detection and quantification of antisense oligonucleotides (ASOs) in experimental and clinical specimens are essential to understand the biological function of novel oligonucleotide-based therapeutics. In this study, we describe a method to detect and quantify ASOs in biological samples, whereby the ASO acts as a splint to direct the ligation of complementary probes and quantitative real-time PCR was used to monitor ligation products. Low levels of 2′-O-methoxyethyl (2′-O-MOE) gapmer ASO in serum, liver, kidney, lung, heart, muscle, and brain tissues can be detected over a 6-log linear range for detection using this method. This method allows quantification of various types of chemically modified ASOs, including phosphorothioate linkage, 2′-O-methyl, 2′-O-MOE, and locked nucleic acid, as well as siRNAs. This method does not require probe modifications, and can be performed using standard laboratory equipment; making it a fast, sensitive, and reliable technique that can be widely applied. This detection method may find potential applications in detection of therapeutic oligonucleotides in biological samples.
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DOI：
10.1016/j.omtn.2017.06.012
发表时间：
2017-09-15
期刊：
Molecular therapy. Nucleic acids
影响因子：
--
作者：
Pendergraff HM;Krishnamurthy PM;Debacker AJ;Moazami MP;Sharma VK;Niitsoo L;Yu Y;Tan YN;Haitchi HM;Watts JK
通讯作者：
Watts JK
DOI：
10.1073/pnas.75.1.280
发表时间：
1978-01-01
影响因子：
11.1
作者：
ZAMECNIK, PC;STEPHENSON, ML
通讯作者：
STEPHENSON, ML
影响因子：
14.9
作者：
Deprey, Kirsten;Batistatou, Nefeli;Kritzer, Joshua A.
通讯作者：
Kritzer, Joshua A.
影响因子：
8.9
作者：
Wee, Eugene J. H.;Trau, Matt
通讯作者：
Trau, Matt
影响因子：
4.6
作者：
Thayer, Mai B.;Humphreys, Sara C.;Rock, Brooke M.
通讯作者：
Rock, Brooke M.