游动放线菌Actinoplanes sp.SE50/110中阿卡波糖脱氧氨基糖单元的生物合成
游动放线菌Actinoplanes sp.SE50/110中阿卡波糖脱氧氨基糖单元的生物合成
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DOI：
10.13343/j.cnki.wsxb.20190109
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
白林泉
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张丹;赵芹芹;蒋明;康前进;白林泉
【目的】解析Actinoplanes sp.SE50/110(简称SE50/110)中阿卡波糖脱氧氨基糖单元的生物合成机制。【方法】经过BLASTp分析,推测了AcbA、AcbB和AcbV负责阿卡波糖脱氧氨基糖单元的生物合成。首先,本研究在SE50/110中分别构建了acbA、acbB和acbV的同框缺失和回补突变株。然后,利用大肠杆菌BL21(DE3)/pGro7分别对AcbA、AcbB和AcbV成功实现了可溶性表达。最后,以D-葡萄糖-1-磷酸为起始底物,通过体外催化反应,研究脱氧氨基糖单元的生物合成过程和相关蛋白的酶学性质。【结果】在SE50/110中分别缺失acbA、acbB和acbV基因后,相应突变株均丧失了阿卡波糖的合成能力,将acbA、acbB和acbV基因分别回补后,各菌株又恢复了阿卡波糖的合成能力,证明了它们均为阿卡波糖生物合成的必需基因。在体外酶促反应中,D-葡萄糖-1-磷酸-胸腺嘧啶转移酶AcbA催化D-葡萄糖-1-磷酸和dTTP合成dTDP-D-葡萄糖,对D-葡萄糖-1-磷酸的K_m值为(0.185±0.053) mmol/L,V_(max)为(2.366±0.217) μmol/(min·mg);对dTTP的K_m值为(4.964±1.089) mmol/L,V_(max)为(60.310±5.419) μmol/(min·mg)。dTDP-D-葡萄糖-4,6-脱水酶AcbB催化dTDP-D-葡萄糖转化为dTDP-4-酮基-6-脱氧-D-葡萄糖,K_m值和V_(max)分别为(0.353±0.089) mmol/L和(306.401±28.740) μmol/(min·mg)。氨基转移酶AcbV催化dTDP-4-酮基-6-脱氧-D-葡萄糖生成dTDP-4-氨基-4,6-双脱氧-D-葡萄糖,K_m值和V_(max)分别为(1.411±0.293) mmol/L和(3.447±0.279) μmol/(min·mg)。【结论】本研究阐明了阿卡波糖脱氧氨基糖单元的生物合成过程,为全面解析阿卡波糖生物合成途径奠定了基础。同时,测定了相关酶的动力学参数,为代谢工程改造SE50/110,提高阿卡波糖产量提供了重要的理论依据。