Half-life extension of a single-chain diabody by fusion to domain B of staphylococcal protein A.
Half-life extension of a single-chain diabody by fusion to domain B of staphylococcal protein A.
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通过与葡萄球菌蛋白 A 的结构域 B 融合来延长单链双抗体的半衰期
DOI：
10.1093/protein/gzr061
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kontermann
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Unverdorben;Färber-Schwarz;Richter;Kontermann
治疗性蛋白质与长循环血浆蛋白质的结合可导致半衰期显著延长。在这些血浆蛋白中，白蛋白和免疫球蛋白是特别感兴趣的，因为它们的半衰期特别长，这在很大程度上是由新生儿Fc受体（FcRn）的再循环决定的。已经建立了许多采用与白蛋白可逆结合的策略，例如使用来自链球菌蛋白G的白蛋白结合结构域。我们在这里表明，重组抗体分子的半衰期也可以通过融合到一个单一的免疫球蛋白结合结构域（IgBD）从葡萄球菌蛋白A延长。该结构域（结构域B，SpAB）由56个氨基酸残基组成，并融合到双特异性单链双抗体（scD B）的C末端。在HEK 293细胞中产生scDb-SpAB融合蛋白，并通过酶联免疫吸附测定和流式细胞术显示保留其抗原结合活性。此外，融合蛋白能够以pH依赖性方式结合人和小鼠IgG。在小鼠中，融合蛋白的终末半衰期从未修饰的scDb的11.1 -2 h提高到11.8 h。虽然融合蛋白没有达到IgG所见的长半衰期，但我们的结果确立了单一细菌IgBD用于半衰期延长目的的适用性。
Binding of a therapeutic protein to a long-circulating plasma protein can result in a strongly extended half-life. Among these plasma proteins, albumin and immunoglobulins are of special interest because of their exceptionally long half-life, which is to a great extent determined by recycling through the neonatal Fc receptor (FcRn). Many strategies have been established employing reversible binding to albumin, e.g. using an albumin-binding domain from streptococcal protein G. We show here that the half-life of a recombinant antibody molecule can also be prolonged by fusion to a single immunoglobulin-binding domain (IgBD) from staphylococcal protein A. This domain (domain B, SpAB) is composed of 56 amino acid residues and was fused to the C-terminus of a bispecific single-chain diabody (scDb). The scDb-SpABfusion protein was produced in HEK293 cells and retained its antigen-binding activity as shown by enzyme-linked immunosorbent assay and flow cytometry. Furthermore, the fusion protein was capable of binding to human and mouse IgG in a pH-dependent manner. In mice, the terminal half-life of the fusion protein was improved from ∼1–2 h of the unmodified scDb to 11.8 h. Although the fusion protein did not reach the long half-life seen for IgG, our results established the applicability of a single bacterial IgBD for half-life extension purposes.
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