黑老虎抗炎有效部位筛选及机制研究
黑老虎抗炎有效部位筛选及机制研究
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DOI：
10.19378/j.issn.1003-9783.2022.12.001
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
吴卫华
中科院分区：
文献类型：
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作者：
孙雅慧;董金金;曹春芽;刘建新;金岸;吴卫华
目的筛选黑老虎根的抗炎有效部位并探讨其抗炎机制。方法采用热回流和超声萃取法制备黑老虎醇提乙酸乙酯萃取物(EC)和黑老虎乙酸乙酯提取物(ET);通过硅胶柱快速制备液相色谱仪分离纯化ET相关组分。采用脂多糖(LPS,100 ng·mL~(-1))诱导RAW264.7巨噬细胞作为体外炎症模型。细胞分为空白对照组、LPS模型组及不同浓度黑老虎提取物预处理组,药物于LPS刺激前2 h加入培养基。采用MTT法检测细胞活性; ELISA法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平;采用Western Blot及qRT-PCR法检测COX-2、iNOS、NF-κB/MAPK通路、Nrf2-HO-1/NQO-1通路相关蛋白及mRNA表达水平。结果(1)EC、ET对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成的抑制率相近,二者的IC_(50)值分别为34.07、34.69 μg·mL~(-1);与空白对照组比较,100 μg·mL~(-1) EC、ET组的细胞活力均显著降低(P<0.001),而在1~50 μg·mL~(-1)浓度范围EC、ET组的细胞活力均无明显变化(P>0.05);与LPS模型组比较,ET 50 μg·mL~(-1)组细胞的IL-6水平明显降低(P<0.05),ET 30、50 μg·mL~(-1)组细胞的MCP-1水平明显降低(P<0.01,P<0.001),具有明显的抗炎作用;而EC不同浓度组细胞的IL-6、MCP-1、TNF-α水平均无明显变化(P>0.05)。(2)采用快速制备液相色谱仪分离出ET的8个组分(ET1~ET8);ET2~ET8组分均有一定的抗炎活性,ET5对NO生成的抑制作用最强,IC_(50)值为17.02 μg·mL~(-1);与LPS模型组比较,ET5 10、20、 40 μg·mL~(-1)组细胞的IL-6、MCP-1、TNF-α水平均明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);ET5在7.5~ 40 μg·mL~(-1)浓度范围对有/无LPS诱导的RAW264.7细胞活性均无明显影响(P>0.05)。(3)与LPS模型组比较, 20、40 μg·mL~(-1) ET5组细胞的iNOS mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.001),10、20 μg·mL~(-1) ET5组细胞的COX-2 mRNA表达显著下调(P<0.001),对COX-2蛋白表达无影响(P>0.05);ET5各浓度组细胞的p65、IKBα、p38、ERK、JNK蛋白磷酸化无明显变化(P>0.05);20、40 μg·mL~(-1) ET5组RAW264.7细胞的核内Nrf2蛋白表达及HO-1、NQO-1 mRNA表达均明显上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论ET5是黑老虎根抗炎作用的主要有效部位,其抗炎机制与激活Nrf2-HO-1/NQO-1通路有关。