DNA Engineering and Hepatitis B Virus Replication.
DNA Engineering and Hepatitis B Virus Replication.
复制标题
DNA 工程和乙型肝炎病毒复制
DOI：
10.3389/fmicb.2021.783040
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发表时间：
2021
影响因子：
5.2
通讯作者：
Hu JL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gan CY;Cui J;Zhang WL;Wang YW;Huang AL;Hu JL
重组DNA技术是制备报告病毒或基因转移载体的重要方法。研究人员已经出于不同的目的将几个基因工程化到HBV基因组中;然而，缺乏对重组策略的系统分析。在这里，使用500 bp的删除策略，我们扫描了HBV基因组，并确定了两个区域，区域I（从nt 2，118到2，814）和区域II（从nt 99到1，198），适合工程。将嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因（Pac）、杀稻瘟菌素S脱氨酶基因（BSD）、新霉素抗性基因（Neo）、Gaussia荧光素酶（Gluc）、NanoLuc（Nluc）、copGFP、mCherry、UnaG、eGFP和tTA 1等10个外源基因插入到这两个区域中，并通过T2 A肽融合到B核心蛋白（HBC）和B表面蛋白（HBS）的开放阅读框中。在99-1198区域的10个基因中的9个和在2118-2814区域的10个基因中的5个的缺失支持松弛环状（RC）DNA的形成。HBV DNA和HBV RNA检测提示外源基因可能通过诱导不利的二级结构的形成而废除RC DNA。该假设得到支持，因为基于HBC序列的UnaG基因的序列优化拯救了RC DNA形成。本研究结果为进一步构建和优化重组HBV提供了信息基础和有价值的方法，并暗示DNA序列可能是HBV进化中潜在的选择压力来源。
Recombinant DNA technology is a vital method in human hepatitis B virus (HBV), producing reporter viruses or vectors for gene transferring. Researchers have engineered several genes into the HBV genome for different purposes; however, a systematic analysis of recombinant strategy is lacking. Here, using a 500-bp deletion strategy, we scanned the HBV genome and identified two regions, region I (from nt 2,118 to 2,814) and region II (from nt 99 to 1,198), suitable for engineering. Ten exogenous genes, including puromycin N-acetyl transferase gene (Pac), blasticidin S deaminase gene (BSD), Neomycin-resistance gene (Neo), Gaussia luciferase (Gluc), NanoLuc (Nluc), copGFP, mCherry, UnaG, eGFP, and tTA1, were inserted into these two regions and fused into the open reading frames of hepatitis B core protein (HBC) and hepatitis B surface protein (HBS) via T2A peptide. Recombination of 9 of the 10 genes at region 99–1198 and 5 of the 10 genes at region 2118–2814 supported the formation of relaxed circular (RC) DNA. HBV DNA and HBV RNA assays implied that exogenous genes potentially abrogate RC DNA by inducing the formation of adverse secondary structures. This hypothesis was supported because sequence optimization of the UnaG gene based on HBC sequence rescued RC DNA formation. Findings from this study provide an informative basis and a valuable method for further constructing and optimizing recombinant HBV and imply that DNA sequence might be intrinsically a potential source of selective pressure in the evolution of HBV.
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影响因子：
5.4
作者：
NASSAL, M
通讯作者：
NASSAL, M
影响因子：
3.5
作者：
Cormack, BP;Valdivia, RH;Falkow, S
通讯作者：
Falkow, S
影响因子：
14.9
作者：
Baron, U;Gossen, M;Bujard, H
通讯作者：
Bujard, H
DOI：
10.1016/0167-4781(94)90224-0
发表时间：
1994-11-22
期刊：
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-GENE STRUCTURE AND EXPRESSION
影响因子：
--
作者：
KIMURA, M;TAKATSUKI, A;YAMAGUCHI, I
通讯作者：
YAMAGUCHI, I
影响因子：
5.7
作者：
Nishitsuji H;Ujino S;Shimizu Y;Harada K;Zhang J;Sugiyama M;Mizokami M;Shimotohno K
通讯作者：
Shimotohno K