Determination of the disulfide bridges in factor Va heavy chain.
Determination of the disulfide bridges in factor Va heavy chain.
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因子 Va 重链中二硫键的测定。
DOI：
10.1021/bi00248a021
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发表时间：
1994
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Mann,KG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Xue,J;Kalafatis,M;Silveira,JR;Kung,C;Mann,KG
1994年6月29日收到的修订版Mandarin pt ®摘要：牛因子Va的M1 = 94000重链含有10个半胱氨酸残基，其分布在构成因子V分子这一部分的2个A结构域中。A1结构域包含四个半胱氨酸，而A2结构域包含六个半胱氨酸。用胰蛋白酶、纤溶酶、V-8蛋白酶和溴化氰消化碘[14 C]乙酰胺标记的牛Va因子重链，分析二硫键和游离半胱氨酸的位置。在HPLC分离所得肽后，通过掺入放射性来鉴定费托斯坦，而在还原后使用SBD-F荧光测定法检测含二硫键的肽。通过氨基酸序列分析来分析所有含半胱氨酸的肽。A1结构域中的四个半胱氨酸与两个二硫键Cys 139-Cys 165和Cys 220-Cys 301相关。在A2结构域中明确鉴定了一个二硫键; Cys 471-Cys 497，并且在A2结构域中Cys 53 s处发现了游离半胱氨酸。在标记可识别的或可溶性的肽，这将允许明确识别的三个剩余的半胱氨酸在A2结构域中遇到了重大困难。基于同源性，Cys 579和Cys 660 ′之间可能存在二硫键，而Cysgg可能是游离的SH。因此，在因子V中发现三种主要的二硫键模式，特征为“a”、“0”和“7”环。每个A结构域在139- 165、471 -497和1684-1710位含有26个残基的“a”环。A1和A2结构域各自在220-301和579-660处含有81个氨基酸残基“/3”环。C结构域分别含有154（Cl）和155（C2）个残基的2“7”环，1866-2020和2025-2180。
Revised Manuscript Received June 29, 1994® abstract: The M,= 94 000 heavy chain of bovine factor Va contains 10 cysteine residues which are distributed in the 2 A domains which make up this portion of the factor V molecule. The Al domain contains four cysteines while the A2 domain containssix cysteines. The locations of disulfide bridgesand free cysteines in bovine factor Va heavy chain were analyzed using iodo [14C] acetamide-labeled factor Va heavy chain digested with trypsin, plasmin, V-8 protease, and cyanogen bromide. Following HPLC separation of the resulting peptides, freecysteines were identified by the incorporation of radioactivity while disulfidecontaining peptides were detected using an SBD-F fluorometric assay after reduction. All cysteine-containing peptides were analyzed by amino acid sequence analysis. The four cysteines in the A1 domain are associated with two disulfide bonds, Cysi39-Cysi65 and Cys22o-Cys3oi. One disulfide bond was explicitly identified in the A2 domain; Cys47i-Cys497, and a free cysteine was found in the A2 domain at Cys53s. Significant difficulties were encountered in preparingidentifiable or soluble peptides which wouldpermit the explicit identification of the three remaining cysteines in the A2 domain. On the basis of homology, it is likely thatCyssgg is a free SH while a disulfide bridge exists between Cys579 and Cys660'Thus, three major disulfide bonding patterns, characterized as “a”,“0”, and “7” loops, are found in factor V. Each A domain contains a 26 residue “a loop at positions 139-165,471-497, and 1684-1710. The Al and A2 domains each contain 81 amino acid residue “/3” loops at 220-301 and 579-660. The C domains contain 2 “7” loops of 154 (Cl) and 155 (C2) residues, respectively, 1866-2020 and 2025-2180.
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