Protocols for Myosin and Actin-Myosin Assays Using Rapid, Stopped-Flow Kinetics.

Protocols for Myosin and Actin-Myosin Assays Using Rapid, Stopped-Flow Kinetics.
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使用快速停流动力学进行肌球蛋白和肌动蛋白-肌球蛋白测定的实验方案。

DOI:
10.1007/978-1-0716-3527-8_11
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发表时间:
2024
期刊:
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
影响因子:
--
通讯作者:
Geeves,MichaelA
Geeves,MichaelA
中科院分区:
--
文献类型:
--
作者:
Kao,Kerry;Geeves,MichaelA

文献摘要

参考文献

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使用停流荧光测定法的快速瞬态动力学现在是用于定义肌球蛋白及其亚片段的ATP酶循环的有力方法,并且在定义肌球蛋白同种型、携带疾病相关突变的肌球蛋白以及小分子对ATP酶循环的影响之间的差异方面已被广泛使用。本文介绍了用停流法测定肌球蛋白和肌动蛋白的经典方法。这些试验包括ATP和ADP与肌球蛋白和肌动蛋白肌球蛋白的结合,ADP从肌球蛋白和肌动蛋白肌球蛋白上的置换,以及ATP裂解成ADP和肌球蛋白上的磷酸盐。还描述了单次和多次周转测定。
Fast transient kinetics using stopped-flow fluorimetry is now a powerful method for defining the ATPase cycle of myosin and its subfragments and has found wide use in defining the difference between myosin isoforms, myosins carrying disease linked mutations, and the effect of small molecules on the ATPase cycle. Here the protocols for completing the classical assays of myosin and actin.myosin using the stopped-flow are described. The assays include ATP and ADP binding to myosin and actin.myosin, displacement of ADP from myosin and actin.myosin, and the cleavage of ATP to ADP and phosphate on myosin. Single and multiple turnover assays are also described.
DOI: --
发表时间: 1982
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影响因子: --
作者:
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