Genetic recoding to dissect the roles of site-specific protein O-GlcNAcylation
Genetic recoding to dissect the roles of site-specific protein O-GlcNAcylation
复制标题
基因重新编码剖析位点特异性蛋白 O-GlcNAcNA 酰化的作用
DOI：
--
复制
发表时间：
2019
影响因子：
16.8
通讯作者：
D. V. van Aalten
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
A. Gorelik;S. G. Bartual;V. Borodkin;Joby Varghese;A. Ferenbach;D. V. van Aalten
由O-GlcNAc转移酶（OGT）催化的O-GlcNAc对核质蛋白的特定Ser和Thr残基的修饰是动物正常发育所必需的丰富的翻译后事件，并且在各种疾病中失调。由于通过单一O-GlcNAc酶（OGA）的快速同时去除，在不影响整个O-GlcNAc蛋白质组的情况下，目前不可能在体内对位点特异性O-GlcNAc修饰进行精确的功能解剖。利用OGT的偶然混杂性，我们表明S-GlcNAc是O-GlcNAc的水解稳定和准确的结构模拟物，其可以在哺乳动物系统中用CRISPR-Cas9编码在其他未受干扰的O-GlcNAcome中。使用这种方法，我们靶向一个难以捉摸的丝氨酸405 O-GlcNAc网站上的OGA，表明这种位点特异性修饰影响OGA的稳定性。基于CRISPR-Cas9的引入位点特异性S-GlcNAc化的方法使得能够剖析蛋白质O-GlcNAc化的作用。S-GlcNAc是O-GlcNAc的水解稳定结构模拟物，被一系列O-GlcNAc结合蛋白识别。
Modification of specific Ser and Thr residues of nucleocytoplasmic proteins with O-GlcNAc, catalyzed by O-GlcNAc transferase (OGT), is an abundant posttranslational event essential for proper animal development and is dysregulated in various diseases. Due to the rapid concurrent removal by the single O-GlcNAcase (OGA), precise functional dissection of site-specific O-GlcNAc modification in vivo is currently not possible without affecting the entire O-GlcNAc proteome. Exploiting the fortuitous promiscuity of OGT, we show that S-GlcNAc is a hydrolytically stable and accurate structural mimic of O-GlcNAc that can be encoded in mammalian systems with CRISPR–Cas9 in an otherwise unperturbed O-GlcNAcome. Using this approach, we target an elusive Ser 405 O-GlcNAc site on OGA, showing that this site-specific modification affects OGA stability. CRISPR–Cas9-based method to introduce site-specific S-GlcNAcylation enables dissection of the roles of protein O-GlcNAcylation. S-GlcNAc, a hydrolytically stable structural mimic of O-GlcNAc, is recognized by a range of O-GlcNAc-binding proteins.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1016/s0021-9258(19)39838-2
发表时间：
1990-02
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
R. S. Haltiwanger;G. D. Holt;G. Hart
通讯作者：
R. S. Haltiwanger;G. D. Holt;G. Hart
影响因子：
4.3
作者：
T. Whisenhunt;Xiaoyong Yang;Damon B. Bowe;A. Paterson;B. V. Van Tine;J. Kudlow
通讯作者：
T. Whisenhunt;Xiaoyong Yang;Damon B. Bowe;A. Paterson;B. V. Van Tine;J. Kudlow
影响因子：
2.9
作者：
Reeves RA;Lee A;Henry R;Zachara NE
通讯作者：
Zachara NE
影响因子：
4.7
作者：
Boeggeman, Elizabeth;Ramakrishnan, Boopathy;Qasba, Pradman K.
通讯作者：
Qasba, Pradman K.
DOI：
10.1073/pnas.100471497
发表时间：
2000-05-23
影响因子：
11.1
作者：
Shafi, R;Lyer, SPN;Marth, JD
通讯作者：
Marth, JD