水牛SIRT 6基因克隆及其在组织中的表达分析
水牛SIRT 6基因克隆及其在组织中的表达分析
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DOI：
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
邓彦飞
中科院分区：
文献类型：
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作者：
崔佳瑜;程隽如;黄坚强;张瑞门;石德顺;杨素芳;邓彦飞
本研究旨在克隆水牛ＳＩＲＴ６基因，构建真核表达载体，并对该基因进行生物信息学及组织表达谱分析。以牛ＳＩＲＴ６基因编码区为种子序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＮＭ＿００１０９８０８４．１），应 用 Ｏｌｉｇｏ７．０软件设计引物序列，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增水牛ＳＩＲＴ６ 基因完整编码区序列，测序鉴定后进行生物信息学分析，构建逆转录病毒载体ｐＭＸｓ－ＳＩＲＴ６－ＩＲＥＳ－ＧＦＰ，并在 ＨＥＫ－２９３Ｔ细胞和水牛胎儿成纤维细胞上进行重组载体表达鉴定；采 集 水 牛 心 脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、脑、皮肤、生殖嵴分别提取 ＲＮＡ，反 转 录 后 以ｃＤＮＡ 为模板进行实时荧光定量 ＰＣＲ，检 测ＳＩＲＴ６基因在各组织中的表达差异。结果表明，水牛ＳＩＲＴ６基因编码区全长１０８０ｂｐ，编 码３５９个 氨 基 酸，其中亮氨酸及脯氨酸含量最高（１０．３％），酪氨酸含量最低（１．１％）。水 牛ＳＩＲＴ６基因核苷酸序列与牛、人 和 小 鼠 的同源性分别为９８．４％、８６．７％和７８．５％，物种间同源性较低。系统进化树结果表明，水牛与牛聚为一支，再 与 人、小鼠聚 为 一 大 支，亲缘关系相对较近，与果蝇亲缘关系较远。ＳＩＲＴ６蛋白理论分子质量为 ３９．４７ｋｕ，分 子 式 为Ｃ１７３７Ｈ２７８３Ｎ５０９Ｏ５１６Ｓ１３，等电点为８．４８，不存在跨膜区，为膜内蛋白；含有Ｓｉｒｔｕｉｎ家族特有的 Ｓｉｒ２去乙酰化酶的催化结构。二级结构预测结果显示，水牛ＳＩＲＴ６蛋白包含１３个α－螺旋、２７个β－折叠、２４个 Ｔ－转角和２０个无规则卷曲。逆转录病毒载体介导的ＳＩＲＴ６基因能在 ＨＥＫ－２９３Ｔ细胞和水牛胎儿成纤维细胞中表达。实 时 荧 光 定 量 ＰＣＲ 结果显示，ＳＩＲＴ６基因在水牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、脑、皮 肤、生殖嵴中均有表达，其中在生殖嵴中表达量最高，在皮肤中的表达量次之，而在肝脏中表达量最低。本试验结果将为水牛ＳＩＲＴ６基因的功能研究提供参考。