Site-directed mutagenesis of the alpha subunit of human prolyl 4-hydroxylase. Identification of three histidine residues critical for catalytic activity.
Site-directed mutagenesis of the alpha subunit of human prolyl 4-hydroxylase. Identification of three histidine residues critical for catalytic activity.
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人脯氨酰 4-羟化酶 α 亚基的定点诱变。
DOI：
--
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发表时间：
1995
影响因子：
4.8
通讯作者：
Kari I. Kivirikko
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
A. Lamberg;Taina Pihlajaniemi;Kari I. Kivirikko
脯氨酸4-羟化酶（EC 1.14.11.2）催化胶原中4-羟基脯氨酸的形成。脊椎动物酶是一种α 2 β 2四聚体，其中α亚基贡献了两个催化位点的大部分。为了研究组氨酸和半胱氨酸残基在这一催化活性中的作用，我们将人α亚基的5个种间保守的组氨酸、4个非保守的组氨酸和3个保守的半胱氨酸分别转化为丝氨酸，并通过杆状病毒载体将突变的α亚基与野生型β亚基一起在昆虫细胞中表达。3个保守组氨酸（残基412、483和501）中的任何一个发生突变，都完全或基本上完全使酶失活，对四聚体的组装或四聚体与聚l -脯氨酸的结合没有影响。这些组氨酸可能提供了将Fe2+结合到催化位点所需的三种配体。其他两种保守组氨酸的突变使酶四聚体的数量减少20-25%，酶四聚体的活性减少30-60%。非保守组氨酸324的突变完全阻止了四聚体的组装，而其他3个非保守组氨酸的突变没有影响。在3个半胱氨酸到丝氨酸的突变中，涉及残基486和511的两个突变在当前条件下完全阻止了四聚体的组装，而涉及残基150的第三个突变对减少四聚体的组装和活性只有轻微的影响。这些数据不支持先前关于半胱氨酸残基参与Fe2+结合位点的建议。另外的诱变实验表明，这两种糖基化的天冬酰胺在四聚体组装或催化活性中没有作用。
Prolyl 4-hydroxylase (EC 1.14.11.2) catalyzes the formation of 4-hydroxyproline in collagens. The vertebrate enzyme is an alpha 2 beta 2 tetramer in which the alpha subunits contribute to most parts of the two catalytic sites. To study the roles of histidine and cysteine residues in this catalytic activity we converted all 5 histidines that are conserved between species, 4 nonconserved histidines, and 3 conserved cysteines of the human alpha subunit individually to serine and expressed the mutant alpha subunits together with the wild-type beta subunit in insect cells by means of baculovirus vectors. Mutation of any of the 3 conserved histidines, residues 412, 483, and 501, inactivated the enzyme completely or essentially completely, with no effect on tetramer assembly or binding of the tetramer to poly(L-proline). These histidines are likely to provide the three ligands needed for the binding of Fe2+ to a catalytic site. Mutation of either of the other 2 conserved histidines reduced the amount of enzyme tetramer by 20-25% and the activity of the tetramer by 30-60%. Mutation of the nonconserved histidine 324 totally prevented tetramer assembly, whereas mutation of the 3 other nonconserved histidines had no effects. Two of the 3 cysteine to serine mutations, those involving residues 486 and 511, totally prevented tetramer assembly under the present conditions, whereas the third, involving residue 150, had only a minor effect in reducing tetramer assembly and activity. The data do not support previous suggestions that cysteine residues are involved in Fe2+ binding sites. Additional mutagenesis experiments demonstrated that the two glycosylated asparagines have no role in tetramer assembly or catalytic activity.
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DOI：
10.1016/s0021-9258(19)50556-7
发表时间：
1992-02
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
R. Noiva;W. Lennarz
通讯作者：
R. Noiva;W. Lennarz
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)46864-0
发表时间：
1994-11
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
T. Helaakoski;J. Veijola;K. Vuori;M. Rehn;Louise T. Chow;P. Taillon-Miller;Kari I. Kivirikko;Taina Pihlajaniemi
通讯作者：
T. Helaakoski;J. Veijola;K. Vuori;M. Rehn;Louise T. Chow;P. Taillon-Miller;Kari I. Kivirikko;Taina Pihlajaniemi
异青霉素 N 合酶 Cu(II) 取代衍生物的电子自旋回波包络调制研究：结构和光谱模型。
影响因子：
2.9
作者：
Jiang,F;Peisach,J;Ming,LJ;QueJr,L;Chen,VJ
通讯作者：
Chen,VJ
通过 NMR、EPR 和穆斯堡尔光谱研究血红素电子结构。
DOI：
--
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
--
作者：
Mikio Nakamura;Yoshiki Ohgo;Akira Ikezaki;Masashi Takahashi
通讯作者：
Masashi Takahashi
鸡脯氨酰 4-羟化酶 β 亚基的 cDNA 克隆和基因组 DNA 克隆的分离。
影响因子：
2.9
作者：
Kao,WW;Nakazawa,M;Aida,T;Everson,WV;Kao,CW;Seyer,JM;Hughes,SH
通讯作者：
Hughes,SH