Improved split fluorescent proteins for endogenous protein labeling.
Improved split fluorescent proteins for endogenous protein labeling.
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改进的荧光蛋白用于内源性蛋白质标记。
DOI：
10.1038/s41467-017-00494-8
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发表时间：
2017-08-29
影响因子：
16.6
通讯作者：
Huang B
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Feng S;Sekine S;Pessino V;Li H;Leonetti MD;Huang B
自互补断裂荧光蛋白（FP）已广泛用于蛋白质标记、亚细胞蛋白质定位的可视化以及细胞与细胞接触的检测。为了扩展这个工具集，我们已经开发了一种筛选策略，用于直接工程化自互补分裂FP。通过这种策略，我们已经产生了黄绿色分裂mNeonGreen 21 -10/11，与常用的分裂GFP 1 -10/11相比，它提高了互补信号与表达FP 1 -10的细胞的背景的比率;以及10倍更亮的红色分裂sfCherry 21 -10/11。基于split sfCherry 2，我们设计了一种可光活化的变体，可以实现基于单分子定位的超分辨率显微镜。我们已经证明了用sfCherry 211和GFP 11标记的双色内源性蛋白质，揭示了内质网转位子复合物Sec 61 B在某些外周小管中的丰度降低。这些新的分裂FP不仅为内源性蛋白质的相互作用网络的成像提供了多种颜色，而且还具有为天然蛋白质复合物的生化分离提供正交手柄的潜力。分裂荧光蛋白（FP）已被广泛用于可视化细胞中的蛋白质。在这里，作者开发了一种用于工程化新分裂FP的屏幕，并报告了具有减少背景的黄绿色分裂mNeonGreen 2，用于多色标记的红色分裂sfCherry 2及其用于超分辨率使用的光活化变体。
Self-complementing split fluorescent proteins (FPs) have been widely used for protein labeling, visualization of subcellular protein localization, and detection of cell–cell contact. To expand this toolset, we have developed a screening strategy for the direct engineering of self-complementing split FPs. Via this strategy, we have generated a yellow–green split-mNeonGreen21–10/11 that improves the ratio of complemented signal to the background of FP1–10-expressing cells compared to the commonly used split GFP1–10/11; as well as a 10-fold brighter red-colored split-sfCherry21–10/11. Based on split sfCherry2, we have engineered a photoactivatable variant that enables single-molecule localization-based super-resolution microscopy. We have demonstrated dual-color endogenous protein tagging with sfCherry211 and GFP11, revealing that endoplasmic reticulum translocon complex Sec61B has reduced abundance in certain peripheral tubules. These new split FPs not only offer multiple colors for imaging interaction networks of endogenous proteins, but also hold the potential to provide orthogonal handles for biochemical isolation of native protein complexes. Split fluorescent proteins (FPs) have been widely used to visualise proteins in cells. Here the authors develop a screen for engineering new split FPs, and report a yellow-green split-mNeonGreen2 with reduced background, a red split-sfCherry2 for multicolour labeling, and its photoactivatable variant for super-resolution use.
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DOI：
10.1083/jcb.200911024
发表时间：
2010-08-09
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Friedman JR;Webster BM;Mastronarde DN;Verhey KJ;Voeltz GK
通讯作者：
Voeltz GK
改善绿色和红色荧光蛋白的亮度和光稳定性，用于活细胞成像和FRET报告。
影响因子：
4.6
作者：
Bajar BT;Wang ES;Lam AJ;Kim BB;Jacobs CL;Howe ES;Davidson MW;Lin MZ;Chu J
通讯作者：
Chu J
影响因子：
16.6
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
46.9
作者：
Cabantous, S;Terwilliger, TC;Waldo, GS
通讯作者：
Waldo, GS