Toolkit for evaluating genes required for proliferation and survival using tetracycline-regulated RNAi.
Toolkit for evaluating genes required for proliferation and survival using tetracycline-regulated RNAi.
复制标题
DOI：
10.1038/nbt.1720
复制
发表时间：
2011-01
影响因子：
46.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
短发夹RNA（Shorthhairpin RNA，shRNAs）是一种多功能的分析工具，可用于体外和体内分析功能缺失的表型。然而，它们用于研究参与增殖和存活的基因，这是癌症和其他疾病的潜在治疗靶点，被shRNA表达无效的细胞的强选择性优势所混淆。因此，我们开发了一个工具包，结合Tet-regulated miR 30-shRNA技术，强大的反式激活因子表达和两个荧光报告分子，以跟踪和分离具有有效靶点敲低的细胞。我们证明，该系统改善了对必需基因的研究，并且足够强大，可以通过抑制单个基因来根除小鼠中的侵袭性癌症。此外，我们将该系统应用于体内阴性选择筛选与汇集的shRNA，并提出了一个简化的，廉价的工作流程，这将有助于使用RNA干扰（RNAi）的识别和评估的基本治疗靶点。
Short hairpin RNAs (shRNAs) are versatile tools for analyzing loss-of-function phenotypes in vitro and in vivo. However, their use for studying genes involved in proliferation and survival, which are potential therapeutic targets in cancer and other diseases, is confounded by the strong selective advantage of cells in which shRNA expression is inefficient. We therefore developed a toolkit that combines Tet-regulated miR30-shRNA technology, robust transactivator expression and two fluorescent reporters to track and isolate cells with potent target knockdown. We demonstrated that this system improves the study of essential genes and was sufficiently robust to eradicate aggressive cancer in mice by suppressing a single gene. Further, we applied this system for in vivo negative-selection screening with pooled shRNAs and propose a streamlined, inexpensive workflow that will facilitate the use of RNA interference (RNAi) for the identification and evaluation of essential therapeutic targets.
登录
查看更多内容
全基因组的RNAi筛查鉴定了与RAS癌基因的多种合成致死相互作用。
影响因子：
64.5
作者：
Luo J;Emanuele MJ;Li D;Creighton CJ;Schlabach MR;Westbrook TF;Wong KK;Elledge SJ
通讯作者：
Elledge SJ
影响因子：
56.9
作者：
Schlabach, Michael R.;Luo, Ji;Elledge, Stephen J.
通讯作者：
Elledge, Stephen J.
影响因子：
64.5
作者：
Scholl, Claudia;Froehling, Stefan;Gilliland, D. Gary
通讯作者：
Gilliland, D. Gary
影响因子：
56.9
作者：
Brummelkamp, TR;Bernards, R;Agami, R
通讯作者：
Agami, R
影响因子：
64.5
作者：
Hochedlinger, K;Yamada, Y;Jaenisch, R
通讯作者：
Jaenisch, R