Chemical crosslinkers enhance detection of receptor interactomes.
Chemical crosslinkers enhance detection of receptor interactomes.
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DOI：
10.3389/fphar.2013.00171
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发表时间：
2014-01-07
影响因子：
5.6
通讯作者：
Kabbani N
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Corgiat BA;Nordman JC;Kabbani N
受体功能依赖于与确保受体定位和信号传导的各种细胞内蛋白质的相互作用。虽然已经优化了许多方法用于细胞中受体-蛋白质相互作用网络（相互作用组）的分离、纯化和蛋白质组学表征，但受体相互作用组的捕获及其动态性质仍然是一个挑战。特别是，以低亲和力结合受体或可以快速从大分子复合物中解离的相互作用组成分的研究是困难的。在这里，我们描述了如何化学交联（CC）可以帮助受体-蛋白质相互作用的分离和蛋白质组学分析。将CC添加到标准亲和纯化和质谱分析方案中可提高蛋白质组学测定中蛋白质捕获的能力，并能够鉴定各种细胞和受体状态下的特异性结合伴侣。CC在受体相互作用组研究中的效用突出了烟碱乙酰胆碱受体以及其他几种受体类型。更好地了解受体及其与蛋白质的相互作用是分子生物学的先锋，是临床医学的一个组成部分，有助于药物开发，药物作用和理解疾病的病理生理学。
Receptor function is dependent on interaction with various intracellular proteins that ensure the localization and signaling of the receptor. While a number of approaches have been optimized for the isolation, purification, and proteomic characterization of receptor–protein interaction networks (interactomes) in cells, the capture of receptor interactomes and their dynamic properties remains a challenge. In particular, the study of interactome components that bind to the receptor with low affinity or can rapidly dissociate from the macromolecular complex is difficult. Here we describe how chemical crosslinking (CC) can aid in the isolation and proteomic analysis of receptor–protein interactions. The addition of CC to standard affinity purification and mass spectrometry protocols boosts the power of protein capture within the proteomic assay and enables the identification of specific binding partners under various cellular and receptor states. The utility of CC in receptor interactome studies is highlighted for the nicotinic acetylcholine receptor as well as several other receptor types. A better understanding of receptors and their interactions with proteins spearheads molecular biology, informs an integral part of bench medicine which helps in drug development, drug action, and understanding the pathophysiology of disease.
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