Bacterial expression and characterization of the ligand-binding domain of the vitamin D receptor.
Bacterial expression and characterization of the ligand-binding domain of the vitamin D receptor.
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维生素 D 受体配体结合域的细菌表达和表征。
DOI：
10.1006/abbi.1999.9999
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发表时间：
1999
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
DeLuca,HF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Strugnell,SA;Hill,JJ;McCaslin,DR;Wiefling,BA;Royer,CA;DeLuca,HF
大鼠维生素 D 受体的配体结合结构域（氨基酸 115-423）在细菌表达系统中表达为氨基末端 His 标记蛋白，并通过 Ni-次氮基三乙酸树脂和 Mono S 柱进行纯化。纯化的蛋白质与其配体 1,25-二羟基维生素 D3 结合，具有高亲和力，与全长蛋白质相似。蛋白质与配体的饱和淬灭了 90% 的色氨酸荧光，这与纯化的蛋白质能够均匀地结合配体一致。添加配体不会改变色氨酸荧光寿命，表明静态猝灭是荧光减少的机制。近紫外圆二色光谱显示添加配体后信号大幅增加，这与芳香族氨基酸侧链环境的变化一致。远紫外圆二色光谱与高α-螺旋含量的蛋白质一致。沉降平衡实验表明，蛋白质形成了高阶复合物，并且通过添加配体，蛋白质在这些复合物中的分布显着改变。
The ligand-binding domain of the rat vitamin D receptor (amino acids 115–423) was expressed as an amino-terminal His-tagged protein in a bacterial expression system and purified over Ni-nitrilotriacetic acid resin and a Mono S column. The purified protein bound its ligand, 1,25-dihydroxyvitamin D3, with high affinity, similar to that of the full-length protein. Saturation of the protein with ligand quenched 90% of the tryptophan fluorescence, consistent with the purified protein being uniformly able to bind ligand. Addition of ligand produced no change in the tryptophan fluorescence lifetime, suggesting static quenching as the mechanism of fluorescence decrease. The near-UV circular dichroism spectrum showed a large increase in signal following the addition of ligand, consistent with a change in the environment of aromatic amino acid side chains. The far-UV circular dichroism spectrum was consistent with a protein of high α-helical content. Sedimentation equilibrium experiments demonstrated that the protein formed higher-order complexes, and the distribution of the protein among these complexes was significantly shifted by addition of ligand.
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通讯作者：
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4.8
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DOI：
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发表时间：
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影响因子：
--
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通讯作者：
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发表时间：
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期刊：
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影响因子：
--
作者：
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DOI：
--
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期刊：
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影响因子：
--
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MacDonald,PN;Haussler,CA;Terpening,CM;Galligan,MA;Reeder,MC;Whitfield,GK;Haussler,MR
通讯作者：
Haussler,MR