慢病毒载体介导过表达和敲低 miR-155 的 AB 8 /13 细胞株的建立
慢病毒载体介导过表达和敲低 miR-155 的 AB 8 /13 细胞株的建立
复制标题
DOI：
--
复制
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
黄慕源
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
唐志明;林栩;梁钊;王晨;韦美理;王蓉;吴昱升;黄慕源
目的.利用慢病毒载体构建稳定过表达 miＲ-155 的 AB 8/13 细胞株(AB 8/13-LV-has-miＲ-155)和稳定敲.低 miＲ-155 的 AB 8/13 细胞株(AB 8/13-LV-has-miＲ-155p inhibiton)，为研究 miＲ-155 在足细胞焦亡和肾脏疾病中的.作用奠定基础。方法.体外培养 AB 8/13 细胞，使用不同浓度嘌呤霉素刺激 AB 8/13 细胞 48 h，在光学显微镜下观.察 AB 8/13 细胞的死亡情况;使用 LV-has-miＲ-155 阴性对照病毒、LV-has-miＲ-155-5p inhibiton 阴性对照病毒分别感.染 AB 8/13 细胞，在荧光显微镜下观察 AB 8/13 细胞的状态和感染效率;在嘌呤霉素筛选出稳定细胞株后，通过实时.荧光定量 PCＲ 法检测稳定细胞株的 miＲ-155 表达量。结果.在 3．5 μg/mL 及以上浓度的嘌呤霉素作用于 AB 8/13.细胞 48 h 后，所有细胞全部死亡。LV-has-miＲ-155 慢病毒感染 AB 8/13 细胞的感染效率达到 80%的最佳条件为在.含 HiTransG P 的完全培养基中进行感染，MOI 为 10;LV-has-miＲ-155-5p inhibiton 慢病毒感染 AB 8/13 细胞的感染效.率达到 80%的最佳条件为在含 HiTransG A 的完全培养基中进行感染，MOI 为 100。qＲT-PCＲ 结果显示 AB 8/13-LV-.has-miＲ-155 细胞株的 miＲ-155 表达量明显升高，AB 8/13-LV-has-miＲ-155p inhibiton 细胞株的 miＲ-155 表达量降低。.结论.成功构建 AB 8/13-LV-has-miＲ-155 稳定细胞株和 AB 8/13-LV-has-miＲ-155p inhibiton 稳定细胞株，为进一步.探究 miＲ-155 在人足细胞焦亡中的作用机制奠定基础。