Robust one-tube Ω-PCR strategy accelerates precise sequence modification of plasmids for functional genomics.
Robust one-tube Ω-PCR strategy accelerates precise sequence modification of plasmids for functional genomics.
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DOI：
10.1093/pcp/pct009
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发表时间：
2013-04
影响因子：
4.9
通讯作者：
Liu YG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen L;Wang F;Wang X;Liu YG
功能基因组学需要构建用于蛋白质表达和靶基因功能表征的载体;因此，简单、灵活和低成本的分子操作策略对于基因组学方法将是非常有利的。在这里，我们描述了一种Ω-PCR策略，该策略能够在环状质粒的任何位置进行多种类型的序列修饰，包括精确插入、缺失和取代。Ω-PCR基于重叠延伸定点突变技术，并因其在PCR过程中的特征性Ω形二级结构而命名。Ω-PCR可以分两步进行，也可以在一个试管中与核酸外切酶I处理组合进行。这些策略在蛋白质工程、基因功能分析和体外基因拼接等方面有着广泛的应用。
Functional genomics requires vector construction for protein expression and functional characterization of target genes; therefore, a simple, flexible and low-cost molecular manipulation strategy will be highly advantageous for genomics approaches. Here, we describe a Ω-PCR strategy that enables multiple types of sequence modification, including precise insertion, deletion and substitution, in any position of a circular plasmid. Ω-PCR is based on an overlap extension site-directed mutagenesis technique, and is named for its characteristic Ω-shaped secondary structure during PCR. Ω-PCR can be performed either in two steps, or in one tube in combination with exonuclease I treatment. These strategies have wide applications for protein engineering, gene function analysis and in vitro gene splicing.
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DOI：
10.1073/pnas.0931425100
发表时间：
2003-05-13
影响因子：
11.1
作者：
Lin, L;Liu, YG;Li, BJ
通讯作者：
Li, BJ
影响因子：
3.5
作者：
Tyagi R;Lai R;Duggleby RG
通讯作者：
Duggleby RG
影响因子：
4.9
作者：
Moritoh, S;Miki, D;Shimamoto, K
通讯作者：
Shimamoto, K
影响因子：
2.7
作者：
Chen, GJ;Qiu, N;Page, MGP
通讯作者：
Page, MGP
DOI：
10.1073/pnas.82.2.488
发表时间：
1985-01-01
影响因子：
11.1
作者：
KUNKEL, TA
通讯作者：
KUNKEL, TA